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（1）在肉膏蛋白胨斜面試管上，用記號(hào)筆寫上將接種的菌名、日期和接種者。
（2）點(diǎn)燃酒精燈或煤氣燈。
（3）將菌種試管和待接種的斜面試管，用大拇指和食指、中指、無(wú)名指握在左手中，并將中指夾在兩試管之間，使斜面向上，成水平狀態(tài)，。在火焰邊用右手松動(dòng)試管塞，以利于接種時(shí)拔出。
（4）右手拿接種環(huán)通過(guò)火焰燒灼滅菌（參照實(shí)驗(yàn)一），在火焰邊用右手的手掌邊緣和小指，小指和無(wú)名指分別夾持棉塞（或試管帽），將其取出，并迅速燒灼管口。
（5）將滅菌的接種環(huán)伸入菌種試管內(nèi)，先將環(huán)接觸試管內(nèi)壁或未長(zhǎng)菌的培養(yǎng)基，達(dá)到冷卻的目的，然后再挑取少許菌苔。將接種環(huán)退出菌種試管，迅速伸入待接種的斜面試管，用環(huán)在斜面上自試管底部向上端輕輕地劃直線，勿將培養(yǎng)基劃破，也不要使環(huán)接觸管壁或管口。
（6）接種環(huán)退出斜面試管，再用火焰燒管口，并在火焰邊將試管塞塞上。將接種環(huán)逐漸接近火焰，再燒灼。如果接種環(huán)上沾的菌體較多時(shí)，應(yīng)先將環(huán)在火焰邊烤干，然后燒灼，以免未燒死的菌種飛濺出污染環(huán)境，接種病原菌時(shí)更要注意此點(diǎn)。
二、液體培養(yǎng)基接種
液體培養(yǎng)基接種是用接種環(huán)、移液器或吸管等工具，將菌體或菌液移至試管、三角瓶等容器中的液體培養(yǎng)基中的一種接種方法。其操作與前面斜面接種基本相同，但應(yīng)注意：液體培養(yǎng)基試管管口或三角瓶瓶口略向上以免培養(yǎng)液流出；加入菌體時(shí)，應(yīng)使接種環(huán)與管內(nèi)壁輕輕研磨，使菌體擦下，塞好棉塞后，將試管在手掌心中輕輕敲打或輕輕搖晃三角瓶，使菌體混合均勻。
試管液體接種是將一定體積的樣品混懸液加入到盛有指定液體培養(yǎng)基的試管內(nèi)，或?qū)⒁欢w積、按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定條件下培養(yǎng)過(guò)的培養(yǎng)液接入盛有指定液體培養(yǎng)基的試管內(nèi)（有時(shí)是指接種環(huán)取一環(huán)，或移液管移液器移取一定的體積，例如0.1ml、1ml等）。涉及試管液體接種的操作有MPN法檢測(cè)大腸菌群/大腸桿菌，以及沙門氏菌、單增李斯特氏菌的二次增菌轉(zhuǎn)接操作等。
此處以用移液器將一定體積的樣品混懸液接入到盛有指定液體培養(yǎng)基的試管內(nèi)為例，具體操作如圖。
①用酒精棉消毒操作臺(tái)面。將移液器吸頭盒放入酒精燈右側(cè)，靠近酒精燈放置。將需要進(jìn)行液體轉(zhuǎn)接的試管插在試管架上，置于酒精燈左邊左手附近。將移液器調(diào)至合適的刻度放于右手附近的架子上。廢物缸放于右手能觸及的范圍內(nèi)。
②點(diǎn)燃酒精燈，左手于酒精燈火焰附近打開移液器吸頭盒，右手持移液器用力插取吸頭兩下以防吸頭松動(dòng)脫落，拔出移液器并蓋上移液器吸頭盒盒蓋。左手取待轉(zhuǎn)接液體試管，試管底部位于左手手心，移液器吸頭和試管口應(yīng)在酒精燈火焰周圍的無(wú)菌區(qū)域之內(nèi)。
③將試管伸向右手。右手食指，中指，無(wú)名指握住移液器，拇指靠在移液器按鈕上，小指和掌心下緣合圍夾住試管帽并用力拔出。如果操作者的手比較小，可以靠食指無(wú)名指和小指握住移液器，拇指仍靠在液體按鈕上。而中指向外伸，靠中指內(nèi)側(cè)和食指、無(wú)名指外側(cè)夾住試管帽。將試管口和移液器吸頭靠近火焰，試管口灼燒一周，在火焰附近將吸頭剛好伸入試管口，抵住試管內(nèi)壁下側(cè)，同時(shí)按住移液器按鈕至一檔（輕微推不動(dòng)）。不要將移液器吸頭伸到試管底部，而應(yīng)傾斜試管使液面傾斜至試管口附近并沒(méi)過(guò)吸頭尖端。右手拇指緩慢松開，使液體緩緩吸入洗頭，注意不要吸入空氣。如果有空氣吸入，必須將液體壓回試管重新吸取。當(dāng)右手拇指完全松開時(shí)，撤離移液器，注意吸頭需盡量一直圍繞在在酒精燈火焰附近，并且吸頭務(wù)必保持向下姿勢(shì)以防止液體倒流入移液器內(nèi)部引起污染。
④吸完液體后，將移液器撤離試管，移液器吸頭移到酒精燈火焰的遠(yuǎn)離操作者的一側(cè)，將試管口在火焰上灼燒滅菌。
⑤滅菌后，右手小指迅速將試管帽蓋上，此時(shí)移液器吸頭仍然要在火焰形成的無(wú)菌區(qū)域內(nèi)，不可離酒精燈火焰太遠(yuǎn)。蓋上試管帽將試管歸位。
⑥左手取待轉(zhuǎn)接入液體的試管，右手保持移液器吸頭在酒精燈火焰附近。
⑦右手保持握移液器姿勢(shì)取下試管帽并灼燒管口。將吸頭抵靠在試管口的內(nèi)壁上，緩緩?fù)苿?dòng)移液器按鈕至底（完全推至第二檔，使殘存在吸頭尖端的液體也流出）。推出液體時(shí)注意不要將吸頭深入試管底部，也不要用力推導(dǎo)致液體飛濺。
⑧左手將試管口靠近火焰滅菌，移液器吸頭移到酒精燈火焰的另一側(cè)。再次灼燒試管口
⑨右手保持握移液器姿勢(shì)將試管帽蓋上，將試管歸位。移取液體完畢后，按壓移液器滑動(dòng)桿使吸頭脫落至廢物缸，移液器放回架子。熄滅酒精燈，將臺(tái)面消毒并收拾干凈。
相對(duì)于試管的液體接種培養(yǎng)，三角瓶接種培養(yǎng)的優(yōu)勢(shì)在于通氣效果好。多見于霉菌或一些細(xì)菌的復(fù)壯培養(yǎng)或者搖床培養(yǎng)等。操作與前面提到的液體試管接種操作基本相同，最后將液體加入三角瓶的時(shí)候，三角瓶?jī)A斜，移液器吸頭抵在三角瓶的內(nèi)壁，緩緩將液體加入，避免噴濺和氣泡，見下圖。
向肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中接種少量菌體時(shí)，其操作步驟基本與斜面接種時(shí)相同，不同之處是挑取菌體的接種環(huán)放入液體培養(yǎng)基后，應(yīng)在液體表面處的管內(nèi)壁上輕輕磨擦，使菌體從環(huán)上脫落，混進(jìn)液體培養(yǎng)基，塞好試管塞后，搖動(dòng)液體，使菌體在液體中分布均勻，或用試管振蕩器混勻。
向液體培養(yǎng)基中接種量大或要求定量接種時(shí)，可將無(wú)菌水或液體培養(yǎng)基注入菌種試管，用接種環(huán)將菌苔刮下，再將菌種懸液以無(wú)菌吸管定量吸出加入，或直接倒入液體培養(yǎng)基。如果菌種為液體培養(yǎng)物，則可用無(wú)菌吸管定量吸出加入或直接倒入液體培養(yǎng)基。整個(gè)接種過(guò)程都要求無(wú)菌操作。
三、半固體培養(yǎng)基穿刺接種
用接種針挑取菌種（針必須挺直），自培養(yǎng)基的中心垂直地刺入半固體培養(yǎng)基中，直至接近管底，但不要穿透，然后沿原穿刺線將針拔出，塞上試管塞，燒灼接種針。
左手將試管水平放置，右手拿接種針，將接種針?biāo)酱┤肱囵B(yǎng)基中。
水平穿刺操作
右手將接種針豎直放置，左手將帶有培養(yǎng)基的試管倒立后，接種針穿入培養(yǎng)基中，見下圖。
倒立法穿刺操作
上述幾種接種法的無(wú)菌操作，凡未敘述的均按實(shí)驗(yàn)一操作。試驗(yàn)者應(yīng)反復(fù)練習(xí)無(wú)菌操作接種技術(shù)，直至較熟練地掌握。
四、將已接種的斜面、液體和半固體培養(yǎng)基放置28—30℃溫箱，培養(yǎng)2—3天后取出觀察結(jié)果。
