分離平板劃線最好采用分區(qū)劃線的方法,目的是將不同菌分離開,便于后續(xù)挑取單菌落鑒定。根據(jù)增菌液濃度決定不同區(qū)之間是否需要燒環(huán)或者更換接種環(huán),保證菌落不會過密集或者過于稀疏。
2、選擇性分離平板上有的不長菌,有的有典型菌落,如何判斷?
標準中為了避免漏檢,選用了兩種或兩種以上的選擇性分離平板。由于不同種類的沙門在平板上生長有差異,所以某些沙門氏菌會出現(xiàn)在某一種平板上生長,其他平板不生長或者生長不典型的情況。根據(jù)標準,任何一種分離平板上出現(xiàn)可疑菌落都需要進行后續(xù)的鑒定,不能直接判定。根據(jù)后續(xù)生化和血清結(jié)果再報告檢出或者未檢出。
3、培養(yǎng)基滅菌前后如何測定pH?
培養(yǎng)基pH值測定是完全溶解,滅菌后,冷卻至25℃進行測量。我司不推薦滅菌前測定,因為滅菌過程中,溫度和成分間的化學反應(yīng),會影響pH值。所以,推薦客戶滅菌冷卻后測量。如果是含瓊脂的培養(yǎng)基可以采用固體電極進行測量。
4、血清學鑒定時H血清鑒定使用的半固體瓊脂配置及挑菌問題
轉(zhuǎn)接半固體培養(yǎng)后,由于瓊脂含量低、平板軟,所以建議采用一次性接種環(huán)輕輕刮取擴散邊緣菌苔進行后續(xù)操作。金屬接種環(huán)質(zhì)地堅硬容易戳破瓊脂。
5、血清學鑒定是否需要做分型?
按照標準要求報告結(jié)果只需報告檢出或未檢出沙門氏菌,不需要報告具體血清型,所以只需要做O多價和H多價就可以了。如果需要后續(xù)進行分型,需要購買群血清及單因子血清。
6、生化鑒定使用的菌懸液濁度要求?
生化鑒定套裝為微量鑒定系統(tǒng),對于菌懸液濃度有要求。使用0.5M濁度進行接種。菌懸液濃度過大或者過小對實驗結(jié)果的準確度有影響。
7、鼠傷寒沙門氏菌接種三糖鐵瓊脂斜面變黑的問題?
可能是由于接種量過大或者培養(yǎng)時間過長導(dǎo)致的,建議減少接菌量或縮短培養(yǎng)時間。
8、BPW在增菌時必需加熱到44℃嗎?室溫的溫度可以增菌嗎?
培養(yǎng)基預(yù)熱至44℃主要目的是保證乳粉的充分溶解,室溫條件下加入樣品可能會導(dǎo)致部分樣品聚集成團,不易溶解。
10、不同克羅諾桿菌的產(chǎn)黃色素能力不同,并且有文獻報道約10%的克羅諾菌屬的菌株不具有產(chǎn)黃色素的能力,所以僅根據(jù)產(chǎn)黃色素進行判定會有漏檢的情況,建議結(jié)合生化試驗進行判斷。在25℃時更易觀察黃色素的產(chǎn)生,溫度過高黃色素顏色會變淡(出自《伯杰氏細菌手冊》)。
根據(jù)我們生化干制套裝中提供的0.5麥氏濁度比濁管作為參比,也可以選用濁度儀。
12、為什么用同一株標準菌株 ATCC29544 做陽性添加后做阪崎干制時西蒙氏檸檬酸有陰性也有陽性?
如果操作正確,保證菌株活性及純度的情況下,ATCC29544 這株模式菌株的西蒙氏檸檬酸鹽反應(yīng)應(yīng)該呈現(xiàn)陽性。
ESM015可以進行準確的篩選,相比較而言ESM016 培養(yǎng)基上生長的菌株特異性更強,結(jié)果更易觀察。
不同過程的溫度的作用是不一樣的。BPW進行36±1℃,主要是為了使得產(chǎn)品中的微生物進行復(fù)蘇;選擇性增菌44±0.5℃是為了提高選擇性;TSA 25℃利于黃色素的產(chǎn)生;生化試驗30℃是為了提供適宜的溫度更利于目標菌的生長并觀察生化反應(yīng)。
目前我們實驗室的陰溝腸桿菌標準菌株在ESM015上為白色菌落,但是1%的陰溝腸桿菌是具有α-葡萄糖苷酶的活性,所以極少的陰溝腸桿菌也會呈現(xiàn)藍綠色菌落。
根據(jù)限量標準進行選擇,目前限量標準中要求一段奶粉進行定量檢測。
陰性對照試驗不用全過程添加,只需在部分生化實驗時添加陰性對照菌株。
我公司成品萬古霉素已經(jīng)過過濾除菌,可直接使用,如果自行配制建議進行過濾除菌。
由于微生物的數(shù)量和分布不均勻?qū)е,微生物不能?fù)檢。
21、自立袋的封口不會造成無氧環(huán)境,阪崎腸桿菌能夠正常生長。
培養(yǎng)基高壓前進行煮沸即可避免黑色沉淀的產(chǎn)生。