答：化學法是每次都要做的，生物法可以定期做，根據滅菌鍋的使用頻率，每周、每半月或每月做一次即可。

 答：SDA不是選擇性培養基，而是一種廣譜的增菌培養基，pH范圍5.4-5.8，某些細菌是可以在SDA上生長的，霉菌和酵母菌總數計數時SDA上生長的菌均應計入霉菌和酵母菌總數；或者可以經過評估選擇含有抗生素（如氯霉素）的SDA或者玫瑰紅鈉瓊脂培養基進行霉菌和酵母菌總數計數。

 答：在進行微生物培養時，若正置培養，瓊脂培養基中的水分易蒸發使平板干裂，不利于微生物的生長；同時水蒸汽會在平皿蓋上形成冷凝水，若回落在培養基表面，會使菌落蔓延生長，無法計數，若冷凝水太多會使培養基與平皿分離，容易滑動倒置培養可減少培養基表面的空氣流動，減慢培養基中水分蒸發的速度，充分維持彈性，有利于菌株的生長和繁殖，防止空氣中雜菌對培養基及培養物造成污染；也會由于重力作用在一定程度上使營養物質沉積到培養基表面，有利于微生物利用營養物質；倒置的平板方便拿取，避免環境中雜菌的污染。

需要注意的是，《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗霉菌和酵母計數》（GB4789.15-2016）是要求正置培養，而非倒置，以防霉菌孢子形成次生菌落，影響計數結果。

問：食品企業的環境檢測應該依據那個標準？

答：GB/T16294-2010《醫藥工業潔凈室(區)懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》都有規定，可以做為參考。

問：請問高壓滅菌鍋需要操作人員有壓力容器操作證嗎?有些人說屬于《特種設備安全監察條例》需要操作證？

答：CNAS-CL 01-A001: 2018的 6.2.2.2條款里有說講到，如實驗室使用的高壓蒸汽滅菌器不屬于簡單壓力容器(定義參見TSG R0003 -2007《簡單壓力容器安全技術監察規程》)時，操作人員需持有特種作業人員證。

問：

答：開瓶后的培養基，如果長時間不使用，還在效期內，建議開瓶后間隔1年進行復驗。如果出現結塊，則不能使用。同理，如果同一批次一次購買量較多，一年內未使用完，也建議進行復檢。

問：什么是不可接受微生物？

答：不可接受微生物通常是指那些已知有明顯致病性的，存在足夠的數量，通過產品的給藥途徑可能導致患者不可接受風險的微生物。如何確定一種微生物是不可接受的，需要進行風險分析，包括微生物負載量、微生物特性、產品特性、給藥途徑、對患者潛在影響等。

問： 培養基滅菌沒有按照廠家提供的滅菌參數進行，是否可行？

答：可以。廠家產品說明書提供的滅菌參數可作為參考使用，使用單位也可以根據自己實驗室的實際情況，在相關法規要求內，使用自己驗證過的滅菌參數來執行。

【法規來源：中國藥典2020版9203藥品微生物實驗室質量管理指導原則   ……培養基滅菌應按照生產商提供或使用者驗證的參數進行……】

問：革蘭氏染色有哪些注意事項？

答：（1）最好挑選18-24h的菌落進行革蘭氏染色,培養時間過久的的革蘭氏陽性細菌可能會被染成紅色而造成假陰性。

（2）挑取適量的菌，不宜過多,均勻涂開。

（3乙醇脫色是革蘭氏染色是否成功的關鍵,15-30s為宜，脫色不夠可能會造成假陽性,脫色過度可能會造成假陰性。

問：如何根據實驗需要制備斜面？

答：根據實驗需求，擺放斜面一般有三種形式：

（1）長斜面：斜面底部剛覆蓋試管底部，上部距管口2.5-3cm左右；例如TSA傳代斜面。

（2）高層斜面：斜面與底層高度約為2:3，即底部高約3cm，斜面長度約2cm；如三糖鐵高層斜面。

（3）普通斜面：斜面底部距試管底部約1cm，上部距管口約2.5-3cm。

問：三糖鐵培養基顏色變化原理是什么？ 

答：該培養基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例為10:10:1，只能利用葡萄糖的細菌，分解葡萄糖產酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸接觸空氣而氧化，加之細菌利用培養基中含氮物質，生成堿性產物，故使斜面后來又變紅，底部由于是在厭氧狀態下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。而發酵乳糖的細菌則產生大量的酸，使整個培養基呈現黃色。如菌種接至培養基培養后產生黑色沉淀，是因為某些細菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氫，硫化氫和培養基中的鐵鹽反應，生成黑色的硫化亞鐵沉淀。