下面詳細介紹一下革蘭氏染色法、乳酸酚棉藍染色法、芽孢染色法、莢膜染色、法鞭毛染色法

一、革蘭氏染色

1 操作步驟

涂片：將培養(yǎng)的不同菌分別作涂片（注意涂片切不可過于濃厚），干燥、固定。固定時通過火焰1-2 次即可，不可過熱，以載玻片不燙手為宜。

初染：加結晶紫液蓋滿標本處，染一分鐘后水洗，并將玻片上積水輕輕甩凈。

媒染：加碘液蓋滿標本處，1分鐘后水洗，甩凈玻片上積水。

脫色：加95%酒精蓋滿標本，輕輕搖動玻片，約20秒鐘后水洗、甩干。

復染：加稀釋石炭酸復紅液或沙黃溶液1-2滴蓋滿標本，染30秒鐘后水洗，待標本自干或用吸水紙印干。

觀察：鏡檢干燥后置油鏡觀察，革蘭氏陰性菌呈紅色，革蘭氏陽性菌呈紫色。以分散開的細菌的革蘭氏染色反應為準，過于密集的細菌，常常呈假陽性。

二、乳酸酚棉藍染色法

1 操作步驟

  染色：于潔凈載玻片上，滴1-2滴乳酸酚棉藍染色液，用解剖針從霉菌菌落的邊緣外取少量帶有  孢子的菌絲置于染色液中，再細心地將菌絲挑散開，然后小心地蓋上蓋玻片，注意不要產生氣泡。置顯微鏡下先用低倍鏡觀察，必要時再換高倍鏡。

  觀察：染好后的標本片用顯微鏡觀察結果，酵母菌細胞、菌絲體和產孢結構等皆可被染成亮藍色；背景為暗淡的藍色。

三芽孢染色法

1 操作步驟

一般革蘭氏染色只能把芽孢周圍的細胞質染色，不能直接把芽孢染上，故芽孢會透亮，能夠觀察到芽孢。若不清晰可進一步采用芽孢染色法。

染色：用接種環(huán)取菌樣涂布于玻片上，待自然干燥。而后通過火焰加熱將菌固定于玻片上。將涂片放入平皿內，片上放兩層濾紙，滴加足量的5.0%孔雀綠水溶液。將平皿蓋好，54℃-56℃水浴加熱30min。取出，去濾紙，用純化水沖洗殘留孔雀綠溶液。加0.5% 沙黃水溶液，染1min。水洗，待干后油鏡觀察。

觀察：染好后的標本片用顯微鏡觀察結果，芽孢呈綠色，菌體呈紅色。

三、莢膜染色法

莢膜(capsule)是某些細菌表面的特殊結構，是位于細胞壁表面的一層松散的粘液物質，莢膜的成分因不同菌種而異，主要是由葡萄糖與葡萄糖醛酸組成的聚合物。

1 操作步驟

涂片：按常規(guī)法涂片，可多挑些菌體與水充分混合，并將粘稠菌液盡量涂開，涂布面積不宜過大。

干燥：在空氣中自然干燥。

染色：用溶液A染5-7分鐘。

脫色：用溶液B洗去結晶紫，脫色要適度（沖洗2遍）。用吸水紙吸干，并立即加1-2滴香柏油于涂片處，以防止CuSO4結晶的形成。鏡檢。

觀察：背景藍紫色，菌體紫色，莢膜無色或淺紫色。

五、鞭毛染色法

長在某些細菌菌體上細長而彎曲的具有運動功能的蛋白質附屬絲狀物，稱為鞭毛。許多細菌都是運動的，通常使用鞭毛移向營養(yǎng)物質。鞭毛很薄，不易染色和觀察。

1 操作步驟

涂片：取幼齡細菌培養(yǎng)物制成涂片。

干燥：火焰干燥及固定。

染色：鞭毛染色液2-3滴，在室溫中染色2-3分鐘。

脫色：水洗，干燥后鏡檢（油鏡）。

觀察：菌體和鞭毛呈紫色。