用懸滴法，通過鏡檢觀察細菌細胞是否具有運動性，可以通過普通顯微鏡或相差顯微鏡檢查。用普通顯微鏡時光線不宜太強，要適當減弱。具體操作步驟方法如下。

待測菌株先在肉湯中培養18h~24h,也可以從生長了18h-24 h的營養瓊脂斜面上挑取少量菌落用1滴肉湯或生理鹽水乳化，注意菌株的濃度不要太大。通過以下方法可以將1滴菌懸液懸浮在凹槽載玻片的蓋玻片上。

1.具體操作步驟

(1)取一潔凈的蓋玻片，在蓋玻片四周點上凡士林(見圖5-16)。

(2)用接種環挑取一小環菌株置于操作好的干凈蓋玻片上，不要讓液滴散開(見圖5-17)。

(3)將凹槽載玻片蓋在蓋玻片上，保持菌滴在槽中間，緩慢用力壓下載玻片，借助凡士林的黏性使載玻片和蓋玻片結合在一起(見圖5-18),快速平穩地將玻片反轉過來，菌滴應處于懸滴狀態(見圖5-19)。盡快觀察。

(4)觀察懸滴玻片時，將鏡下聚光鏡從其正常位置略微下調，并使光圈幾乎處于全關閉狀態。這是因為未染色的菌體在太亮的環境下難于被觀察到，而且，光造成的熱效應會使菌體喪失運動性。

(5)首先用低倍物鏡聚焦懸液的邊緣，移動載玻片，讓懸液在視野的中央。通過觀察液滴邊緣線外出現的小冷凝水滴能夠很容易識別出懸滴的位置。換成高倍物鏡(40倍)對液滴邊緣重新聚焦。必要時，略微打開光圈。這時細菌應很容易觀察到，尤其在液滴的邊緣，深度較淺，細菌停留在有限的空間領域。用油鏡觀察玻片時，因為聚焦時鏡頭的移動可能造成蓋玻片移動，從而造成液滴流動。這會嚴重影響觀察效果，沒有經驗的人員甚至還會誤認為是菌體在運動。

注意：必須正確區分布朗運動(一種液體中懸浮的微小粒子的連續運動，是由于液體周圍的分子不對稱的撞擊造成的)、玻片輕微傾斜造成的一個方向上的漂移和真正的菌體運動。

有時可以根據運動方式的不同來鑒定菌種，如李斯特氏菌是翻跟頭式的運動，噬胞菌為滑行運動。要想通過運動方式來鑒定菌種，就必須熟悉不同菌種的運動方式，觀察比較已知菌株的運動情況可以不斷積累經驗。

2.注意事項

檢驗時應注意以下幾點：

(1)細菌細胞間有明顯位移者，才能判定為運動性。由于細菌細胞太小，在懸液中有布朗運動，即每個細胞均在原地顫動，彼此的位置關系卻沒改變，切不可將這種現象誤判為具運動性。由于載玻片與蓋玻片之間懸液過多，在使用油浸物鏡調焦時，懸液在蓋玻片下流動。這時可看到大批細菌細胞都以同一速度向同一方向運動，這也不是真正的運動性。真正的運動性應是細菌細胞彼此的位置關系明顯的改變。細菌的運動性因種或菌株而異。有的運動迅速，有的運動緩慢。能運動的菌株也不一定每個細胞都同時運動，常常是大多數細胞不運動，少數細胞明顯運動。

(2)有些細胞不以鞭毛運動，而是滑動。鏡檢時應注意與游動區分開。一般游動速度高，滑動則遲緩。游動只能在懸液中運動，滑動則須附在固體表面進行。

(3)如室溫太低，以致載物臺溫度太低。有的細菌會因溫度太低而不能運動，應該設法提高載物臺或載玻片的溫度，達到試驗菌能運動的溫度(如在室溫較高的試驗室鏡檢，或將載玻片放置保溫箱中一會兒再觀察)。

(4)鏡檢好氧菌時，則可能因蓋玻片下供氧不足而使試驗菌不能表現出運動性，遇到這種情況則應使蓋玻片下殘留一兩個小氣泡，鏡檢氣泡四周或蓋玻片邊緣的細菌運動性。

(5)用油鏡觀察時，蓋玻片的厚度以不超過0.17mm為宜。用過厚的蓋玻片，調焦有困難。用相差油鏡觀察時載玻片的厚度以約為1.2mm為宜。

半固體穿刺

根據有鞭毛的細菌可以在半固體培養基中游動卻又不能任意游走的現象，觀察細菌生長情況，判定試驗菌是否有運動性，可使用試驗菌能良好生長的培養基，在其中加入0.3%~0.6%的瓊脂(所用瓊脂的量可因品牌不同而異),一般半固體培養基應是放倒試管不流動，而在手上輕輕敲打時瓊脂即破裂為宜。對一般常見細菌可結合葡萄糖氧化發酵試驗觀察運動性。

用直針穿刺接種試驗菌于半固體培養基內(見圖5-20),適溫培養。細菌的運動性可用透射光目測。如生長物只生長在穿刺線上，邊緣十分清晰，則表示試驗菌無運動性；如生長物由穿刺線向四周呈云霧狀擴散，其邊緣呈云霧狀，則表明試驗菌株有運動性。對生長快的細菌培養1d后觀察。如第一天不能判定可在第2d-3d再觀察。如2d-3d時仍不能判定是否有運動性，可延遲5d-6d再觀察一次。因為游動力弱的細菌，在半固體培養基中第1d-2d中尚不能從穿刺線游開，故需多培養幾天再觀察。如試驗菌在半固體培養基中產氣泡會影響穿刺線上的生長物的擴散情況，不可誤將不運動的細菌判為有運動性。如試驗菌是好氧細菌，穿刺線上生長物很少，可檢查從培養基表面向下滲入的生長物的情況。