1、培養(yǎng)基煮沸溶解后再高壓滅菌，還是直接高壓滅菌存在疑惑。

拿麥康凱瓊脂舉個例子，溶解后滅菌，平板上沒有不溶的結晶紫，沒有紫色的斑點；相對比未溶解滅菌的，平板上有結晶紫和紫色的斑點。所以正確的做法是先煮沸溶解后再高壓滅菌。

2、培養(yǎng)基PH值為什么不在標準范圍內？

其實出現(xiàn)這個情況的問題有很多種，大致我分為這么6大點：

①質量不好（生產廠家出廠時pH就不正確）；

②滅菌問題（高壓滅菌溫度過高或滅菌時間過長，導致葡萄糖類焦化從而pH降低）；

③保存時間（超過保質期或結塊）；

④水質出現(xiàn)問題（可以用去離子水、純化水、蒸餾水不能用礦泉水、自來水）；

⑤保存溫度（保存溫度過高）；

⑥光線直射總結本人認為以上6點都可能導致培養(yǎng)基pH出現(xiàn)偏差，如果出現(xiàn)此類問題，建議逐一排查，直到問題解決。

3、培養(yǎng)基高壓滅菌時為什么會焦化？

不少檢驗人員在實驗時，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過滅菌的培養(yǎng)基有焦化現(xiàn)象，我認為引起此現(xiàn)象的主要原因有以下4點：

①可能你滅菌的時候溫度超過了121℃（正常115-116℃20min即可）；

②滅菌時間過長；

③培養(yǎng)基在容器中裝的太多（不要超過容器容量的80%）；

④滅完菌的培養(yǎng)基在高溫環(huán)境中保存的時間過長，這些都會導致培養(yǎng)基發(fā)生焦化現(xiàn)象。

4、培養(yǎng)基PH怎么測定？

通常分兩種情況：

①對于無需高壓滅菌的培養(yǎng)基，先煮沸溶解后再冷卻至25℃時，測定其pH值（固體培養(yǎng)基至少測2個點，取其平均值）；

②對于需要高壓滅菌的培養(yǎng)基，高壓滅菌后，冷卻至25℃測其pH（固體培養(yǎng)基至少測2個點，取其平均值）。

5、含瓊脂培養(yǎng)基在倒平板為什么有時候不凝固或凝固不好？

針對以上情況，我做了分析：

①針對需要高壓滅菌的培養(yǎng)基，倒平板時候要先搖勻（因為瓊脂分子量比較大，在冷卻過程中容易沉淀到底部，導致瓊脂分散不均勻）；

②針對無需高壓滅菌的培養(yǎng)基，一次煮沸溶解后不能直接倒平板，應重復煮沸溶解3-5次（因為一次不能確保瓊脂完全溶解）。

6、為什么同一品牌的不同批號，粉末顏色有差別？

分析可能有3個原因：

①此培養(yǎng)基成分含有染料或指示劑；

②不同批次粉末培養(yǎng)基含水量不同，一般要求≤6%，含水量越高，顏色越深；

③加工時球磨時間越長顏色越深。

此次分享，主要是對微生物培養(yǎng)基使用這塊會遇到的常見問題進行簡單分析，希望通過短短幾行字，能夠幫助廣大在實驗中出現(xiàn)過此類問題的同仁，其中若有不對的地方忘諸位指正，謝謝！