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線上直播完美收官
課程結束后
小伙伴們提出了工作中的一些疑問
雖然老師進行了耐心的解答
小伙伴們感覺有些問題理解不到位
希望有文稿版的
利于鞏固學習
小編根據小伙伴們反饋的問題
對于老師們的答疑進行一一整理
由于內容較多
將分批分享給大家
請各位小伙伴查收今日份的知識
1.微生物試劑盒法測定中，試劑盒測定結果與傳統法結果差別大的原因是什么？
傳統試管法和試劑盒方法原理相同，但反應體系、培養時間都有差異，但實際中發現兩種方法結果未有太大差異，如果兩種方法結果差異較大，建議從人、機、料、法、環等各個細節查找原因，關鍵要熟練操作。
2.微生物試劑盒法測定中，不同人員在相同條件下測定結果差別大的原因是什么？
微生物法測維生素，無論是傳統法還是試劑盒，建議實驗室固定每個項目的檢驗人員，至少保證一個項目2個人員操作，以保證數據的穩定，然后制定SOP，規定不同人員操作的變異系數差異允許范圍。
3.微生物試劑盒法測定中，怎樣確保樣品稀釋在標準曲線之內？
如果是樣品類型和含量比較固定，依靠經驗常規重復操作即可。如果是未知樣品，首先參考標簽標識，按照標準的含量推算和預判含量，如果不能確定某一個含量，一個樣品做2-3個稀釋度，保證某一個稀釋度在標曲范圍內。
4.微生物法測定中，空白對照混濁如何解決？
空白對照有未接種空白和接種空白兩種，如果是未接種空白渾濁，除去培養基基質的問題，最大的可能就是污染；接種空白渾濁，除去培養基和污染的因素，還有一個原因就是菌株發生變異，建議純化到MRS平板上，再挑單菌落，在進行傳代，如果還是不理想，建議更換菌株。
5.老師，如果我的穿刺保藏的工作菌株保存3個月（標準規定保存1個月）后仍能傳代存活，是否可以繼續使用？
標準上是一個月傳一代，目的為了保證菌株的活性。如果一定要保存3個月，中間應該增加對菌株的驗證，反倒麻煩。
6.葉酸和VB12檢測時，在待測液制作環節時，您強調培養基煮沸后立即晾涼，我們實際應用是煮沸后自然晾晾，沒有立即冷卻，煮沸后到培養基使用大概用時2h
立即冷卻，避免培養基顏色變深。
7.老師，理解玻璃器皿泡酸是為了使器皿更加干凈，具體原因是什么呢？
都是為了保證玻璃器皿無殘留，洗刷方式可以根據各自實驗室規定的操作過程進行操作，最終目的就是為了洗刷干凈無殘留。高溫烘干這步是必須的。
8.老師，請問從種子培養液中接種到接種液中，接種量是i多少？ 接種量不同會對結果有影響嗎？種子培養液為什么在接種到培養液，是為了活化傳代嗎？
為了增加活性，如果是傳代的話一般100微升。接種量不同對結果沒有影響，培養時間可能會有改變。
9.老師，加標的中間液是滅菌前加入還是滅菌后？還是哪一個步驟加進去？
是滅菌前加入，為了保證和樣品處理再同一條件下。
10.老師，我可以用吸光度值為橫坐標，生物素含量為縱坐標繪制標準曲線嗎？
可以，看操作習慣，但是標準中明確了生物素含量為橫坐標。
11.四個維生素實驗中避光是自然光還是所有光源？
避開自然光。
12.生物素測定在調pH值時，超過了規定的pH之后，可以用鹽酸調回來嗎，會影響結果嗎？
不可以用HCl調回，如果需要pH值調回，需要用H2SO4，不額外引入氯離子。
13.用玻璃具塞試管可以代替鋼管帽嗎？
這里的玻璃具塞說的是膠塞是么，不建議使用，一是膠塞不能放到170℃以上的烘干箱烘干。而是在滅菌過程中氣體壓力改變會導致體積發生變化。實驗室可以訂制不銹鋼材質的試管帽。
14.是否可以增加S2-S10的標曲濃度，如 乘以十倍?
標準給出的濃度范圍，是菌液和標準出現適宜濃度梯度的范圍，如果提高濃度，可能導致標準曲線沒有梯度，實驗失敗。
15.老師，請問進行生物素試劑盒法方法驗證時，是需要用質控樣還是用市場購買的奶粉就行？還有，是只需要采用試劑盒方法測定結果計算精密度、準確度等，還是要同時進行國標法測定后進行兩種方法的結果比較
方法驗證是對該試劑盒在本實驗室內的使用和國標的符合程度，在人員不足、工作量較大的情況下作為國標方法的替代，所以對照的樣品建議用本工廠內的樣品，也可以購買質控樣和市售產品，對驗證的樣品進行國標法的檢測，再在同樣的實驗條件下，用試劑盒對該樣品測定，實驗室自己設置可以接受的變異范圍，然后對試劑盒的效果評價，參與評價的因素一定要包括準確度和精密度，由于試劑盒本身有檢出限和定量限，建議聯系試劑盒的供應商參與驗證。可以參考的標準《商品化食品檢測試劑盒方法評價》（SN/T2775-2011)；《微生物檢測方法確認和驗證指南》（RBT033-2020）。
