實驗室用菌種一是到國家法定機構(gòu)采購，二是購買ATCC菌種，三是科研中菌種交流。不管是哪種來源，均統(tǒng)一采集。采集中嚴格按照規(guī)范執(zhí)行。要求包裝可靠，采集迅速，不泄漏不污染。保證菌種合格和環(huán)境安全。采集中要有菌種傳代標識。選擇有資質(zhì)的標準菌株的合格供應(yīng)商，每批標準菌株必須附帶有供應(yīng)商的合格證或檢測報告或說明書，來證明所采購的標準菌株是合格的。

2.2標準菌株和驗收

實驗室收到標準菌株，首先應(yīng)進行符合性感官檢查，記錄菌株號和標準菌株來源途徑信息，確保溯源性清楚。同時還應(yīng)記錄標準菌株名稱和數(shù)量、生產(chǎn)日期、接收日期和有無破損等情況。

2.3凍干標準菌株的復活

①開啟產(chǎn)品包裝：先用70%酒精棉擦拭外包裝，從凹口處撕開產(chǎn)品外包裝，撕掉標簽上的拉片，將其貼于菌株接收、保存記錄序號前面。

②復活：選擇合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件（根據(jù)生產(chǎn)商說明或有關(guān)技術(shù)通則見 附錄）進行復活。菌種的首次活化最好是在非選擇性瓊脂培養(yǎng)基上，除非特殊情況或特別推薦，一般不用液體培養(yǎng)基。凍干菌株的傳代次數(shù)不得超過5代，從標準菌株保藏中心購買的凍干標準菌株為第F0代。

捏管帽處安瓿瓶（僅一次）使其釋放水合液體。垂直握住安瓿瓶并輕拍之，使液體流入含小球的管底。通過擠捏壓碎小球使其與液體混合，立即將拭子浸于水合液體。擠壓并旋轉(zhuǎn)拭子，接種于初級培養(yǎng)平板，接種圈的直徑約為25mm，用一無菌接種環(huán)在先前接種區(qū)域劃線10-20次，促使分離出單菌落。同時吸出部分菌液接種胰蛋白胨大豆肉湯管，副溶血性弧菌接種3%氯化鈉菌胰蛋白胨大豆肉湯管。將接種好的平板和管立即進行培養(yǎng)。細菌培養(yǎng)溫度通常為25℃或37℃。多數(shù)凍干菌株會在幾天后長出，但是少數(shù)菌會表現(xiàn)出延滯期延長的現(xiàn)象，需要將正常培養(yǎng)時間加倍。復活后的菌株為F1代。

附錄：

③將TSB生長的濃菌液吸0.5mL于菌株保藏管充分混勻后將液體吸出，將保藏管-18℃保存1-3年為標準儲備菌株F2代。將平板上生長的良好菌株接種于營養(yǎng)瓊脂斜面（副溶血性弧菌用3%氯化鈉營養(yǎng)瓊脂）36℃培養(yǎng)24h當作工作菌株，記錄為F3代。

2.4工作菌株確認方法及依據(jù)

用無菌接種環(huán)取上述培養(yǎng)物，在相應(yīng)的培養(yǎng)基平板（營養(yǎng)瓊脂、大豆胰蛋白胨瓊脂）上或相應(yīng)的細菌鑒別平板（如伊紅美藍、麥康凱、BP等上劃線分離單個菌落，置適宜條件下培養(yǎng)（若該類微生物為厭氧菌，則培養(yǎng)條件應(yīng)為厭氧條件）。以同樣方法取真菌和酵母菌至SDA（薩布羅培養(yǎng)基）平板上或玫瑰紅鈉培養(yǎng)基平板上，23～28℃下培養(yǎng)7d；培養(yǎng)后觀察是否具有典型的菌落狀態(tài)，然后挑取單一純菌落，進行革蘭染色、鏡檢，觀察其染色特征及菌體形態(tài)以確定菌種。

2.5 污染處理

假如在該平板上發(fā)現(xiàn)有其他菌落生長，則說明操作有污染或菌種不純。要將該污染培養(yǎng)物做滅菌處理，尋找原因，重新分離挑選純菌落。

2.6 菌種保存

所有菌種均由實驗室專人(雙人雙鎖)保存于專用冰箱或其它保存方式。要建立菌種登記臺帳，詳細記錄菌種采集、保管、制備、使用、處置情況；每一種菌種一定要有檢測鑒定報告（具體的的鑒定方法見ATCC提供的菌種證書方法）；

具體菌種保存方法一般為：

將復蘇后肉湯與滅菌甘油按15%甘油比例（肉湯8.5mL+甘油1.5mL）混合，-30 ℃凍存，（可用2mL凍存管凍存多管），作為保藏儲備菌株F1代，也可使用商品化的菌種保存管。

2.7菌種的傳代

①標準菌株的復蘇：

a.菌種操作應(yīng)在無菌條件下進行，防止雜菌污染。

b.每次使用和復蘇時只需將小珠在平板上滾動或置肉湯中培養(yǎng)。

②標準儲備菌株每轉(zhuǎn)接一次須進行確認。（確認方法一般為他們各自獨有的形態(tài)，在鑒別培養(yǎng)基上的形態(tài)）

③工作菌株轉(zhuǎn)接的方法：

a.配制營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（溶血性弧菌加3%氯化鈉 ），121℃高壓滅菌15分鐘后分裝在試管內(nèi)，冷卻后備用。

b.在無菌條件下，用接種環(huán)挑取菌苔至新鮮試管上作“米”字形劃線接種，放置在36℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24小時。

④工作菌株的使用：

a.內(nèi)部質(zhì)量控制：一個月一次陽性對照、培養(yǎng)基每批驗收；

b.外部質(zhì)量控制：能力驗證、實驗室比對；

⑤工作菌株的期間核查：

a.期間核查的頻率：每半年對使用標準菌株進行一次期間核查。

b.工作菌株期間核查的方法及依據(jù)：同工作菌株的確認一樣。

c.建立標準菌株期間核查記錄。

2.8菌種的標識：
菌種代數(shù)的計算為干粉菌種為第0代，轉(zhuǎn)接一次加一代。具體標識為：例單增李斯特氏菌第0代，標識為DZ-0，第一代標識為DZ-01第一代有12支，則DZ-01-01、……、DZ-01-12；并標明日期：如2020.02.13這樣填寫。

2.9 菌種的保藏

①將試管內(nèi)菌種放入冰箱中2～8℃冷藏保存。

②將傳代并經(jīng)過培養(yǎng)后的菌種放入冰箱中2～8℃保存。每支保存菌種需標明菌名、標準編號、傳次、傳代日期。

2.10 菌種的銷毀

①菌種使用后或超過貯存期的應(yīng)進行銷毀。

②需銷毀的菌種，應(yīng)用高壓蒸汽（121℃）滅菌30分鐘。

③滅菌后，再進行清洗和處理。

④銷毀的菌種應(yīng)做好記錄。銷毀時由化驗負責人監(jiān)督銷毀，保管人員負責銷毀。