一、目的

為證實ACQUITY UPLC^® I-Class系統可使柱外譜帶擴展達到最低，從而使進行高分離度及高通量UPLC^®分離時的分離效果更佳。以下將通過雜質分析以及彈道梯度說明這些改善的重要性。

二、背景

已證實在多種應用中，采用填裝亞2-_m顆粒的色譜柱能夠改善色譜分離的峰容量以及分離度，從而大幅度提高分離度以及通量。

然而，為使一項指定分離所可能達到的分離度達到最大，需要使系統擴散性達到最小。屬于進樣器后系統流路的任何液體管路或連接均可導致柱外譜帶展寬。包括進樣閥、溶劑預熱裝置、連接管路、配件、及光學流通池。許多供應商已嘗試改善UHPLC系統的擴散性，但收效甚微。雖然可減小擴散性，但仍無法達到最佳從而可獲得窄孔UPLC色譜柱(內徑2.1 mm)的全部優點。這些色譜柱要求較低的流速，這使得分析每份樣品時的投資回報率更高，從而可在足夠的分離度下進行高效分離。

三、解決方案

ACQUITY UPLC I-Class系統可減小柱外譜帶分布。新設計的UV檢測器流通池的光學路徑與先前的ACQUITY UPLC的光學路徑相同，可獲得同樣高的靈敏度；另外，已重新設計流體管路以及連接，以使譜帶擴散進一步減小。必須使用溶劑預熱器以使可導致柱上分散效應的溫度梯度減至最低。因此，溶劑預熱器的體積應足夠小，以確保使樣品簇(sample plug)以最小的擴散度到達色譜柱頭部，而且即使在高溫及高流速下也可提供極佳的溶劑加熱性能。根據您實驗室的需求，可在兩種樣品管理器(Sample Manager)中選擇一種來構成ACQUITYUPLC I-Class系統。不管是使用固定定量環式(SM-FL)還是流通針式(SM-FTN)進樣器，均已通過采用小體積的針頭端口、連接管路、及內部閥門通道使由進樣器所導致的擴散性減至最低。通常，固定環式進樣器的設計可使柱外譜帶擴展程度更小，這是由于其減小了注射器流動路徑的體積。通過對每一組件進行優化，已使柱外譜帶擴展較之任一其他市售LC系統顯著降低。表1總結了在使用多種系統(包括UHPLC系統)后所獲得的譜帶擴展數值。

ACQUITY UPLC家族在保持超高效分離的整體性方面的性能優于所有其他系統，其中ACQUITYUPLC H-Class系統的譜帶擴展減少至9 _L，而ACQUITY UPLC I-Class系統則減少至低至5.5 _L。

降低的系統擴散性可直接導致ACQUITY UPLCI-Class系統的分離度增加。分離可以達到彈道梯度，同時保持典型分析梯度中的分離度。圖2說明對丁卡因進行雜質分析的結果。

采用ACQUITY UPLC I-Class系統及購自供應商B的UHPLC系統，在相同條件下進行分離，結果ACQUITY UPLC I-Class的分離度顯著更佳。供應商B的系統按其建議安裝有光路長度為60 mm的流動池，結果發現其產生了明顯的譜帶擴展，以至于測不到肩峰。

四、小結

ACQUITY UPLC I-Class系統具有不可比擬的性能，可用于當今最具挑戰性的分離任務。不管您的實驗室需要增加分離時的分離度還是需要增加樣品通量，它靈活的系統構造都可使得UPLC色譜柱上的柱外譜帶擴展最低，從而獲得最佳的分離性能。