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一、脫氣
流動相脫氣可以避免HPLC系統(tǒng)出問題，從而順利得到理想的數(shù)據(jù)。HPLC系統(tǒng)內(nèi)是不希望有氣泡存在的。HPLC泵在輸送液體時要產(chǎn)生很大的力量，由于氣體的壓縮比與液體相比大的多，因而當(dāng)氣泡存在時，你將觀察到瞬間的流速降低和系統(tǒng)壓力下降。如果這個氣泡足夠大，液相泵將不能輸送任何溶劑，而且如果壓力低于預(yù)先設(shè)定的壓力低限，泵將停止工作。有些泵設(shè)計可以很好地排除氣泡，而也有一些泵設(shè)計當(dāng)氣泡存在時將停止運(yùn)轉(zhuǎn)。
當(dāng)一個氣泡通過輸液泵時，由于系統(tǒng)壓力大，氣泡通常會溶解在流動相溶液中，隨流動相通過柱子。但是到達(dá)檢測器流通池時系統(tǒng)壓力又恢復(fù)到了大氣壓，因而氣泡可能在檢測器流通池中又顯現(xiàn)，在色譜圖上會出現(xiàn)不規(guī)律的毛刺。
紫外/可見光（UV/VIS）檢測器的液相色譜圖中的噪音毛刺通常是氣泡進(jìn)入并通過流通池的征兆。此外，對于利用待測物質(zhì)在電極表面發(fā)生氧化還原反應(yīng)引起電流變化而進(jìn)行檢測的電化學(xué)（EC）檢測器，對流動相中的溶解氧的存在也非常靈敏。此外，氣泡的存在有時還會導(dǎo)致保留時間不重現(xiàn)。
常用的脫氣方法：
1、吹氦脫氣法。
2、加熱回流法。此法的脫氣效果較好。在操作時要注意冷凝塔的冷卻效率，否則溶劑會丟失，混合流動相的比例會有變化。
3、抽真空脫氣法。此法可使用真空泵，降壓至0.05-0.07MPa即可除去溶解的氣體。但是由于真空脫氣會使混合溶劑組成發(fā)生變化，從而影響到實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性，因此多用于單溶劑體系的簡單分析。
4、超聲波脫氣法。將欲脫氣的流動相置于超聲波清洗器中，用超聲波震蕩10-20min。此法的脫氣效果最差。
5. 在線脫氣法。現(xiàn)在商品的HPLC儀器，均可配在線脫氣機(jī)。在線脫氣使用簡單，低故障，有效。建議購買儀器時一定要購買，有的公司是作為選購件，所以與儀器公司談配置時應(yīng)與公司確認(rèn)。
任何顆粒物進(jìn)入HPLC系統(tǒng)后都會在柱子入口端被篩板擋住，最后的結(jié)果是將柱子堵塞，表現(xiàn)出的特征是系統(tǒng)壓力增加并使色譜峰變形。因此，要采取各種預(yù)防措施，包括操作步驟和商品儀器自身的各種過濾設(shè)計，努力防止或減少顆粒物進(jìn)入HPLC系統(tǒng)中，從而延長儀器和色譜柱的使用壽命，并提高數(shù)據(jù)的可靠性。在HPLC系統(tǒng)中，顆粒物的主要來源有三個途徑：流動相、被測樣品和儀器系統(tǒng)部件的磨損物。
二、過濾
1、流動相
流動相通過0.45 μm微孔濾膜過濾對于從流動相中除去所有顆粒物是一個有效方法。0.2 μm微孔濾膜也可以用，但是它們就這個應(yīng)用而言并不比0.45μm微孔濾膜更有效，而且它的過濾速度會更慢，特別是當(dāng)實(shí)驗(yàn)室使用的試劑和水的質(zhì)量不太好時。建議實(shí)驗(yàn)室在編寫制定他們流動相制備標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOPs）時規(guī)定，可以借鑒國際上同類實(shí)驗(yàn)室的規(guī)定，即：
流動相制備僅采用HPLC級液體時不需要過濾，反之所有流動相組成在使用前必須過濾。
在連接儲液瓶和泵的輸液管的末端入口采用下沉式過濾器（常見材質(zhì)有熔融玻璃砂芯濾板和微孔金屬的兩種）也是很重要的。這個過濾器的規(guī)格為≥10 μm的微孔物質(zhì)，所以它不能取代流動相過濾步驟，但是它能除去系統(tǒng)中的塵土并保證儲液瓶、輸液管使用的可靠性。2、被測樣品
液相系統(tǒng)中的第二個顆粒物來源是被測樣品。一些實(shí)驗(yàn)室在將他們的樣品放置在自動進(jìn)樣器盤（或手動進(jìn)樣）以前，所有樣品都先通過一個0.45 μm針筒式過濾器過濾。這是一個有效除去被測樣品中顆粒物的方法。但是這個過程也有一點(diǎn)需要關(guān)注：你使用了針筒式過濾器就不可能100%得到通過過濾器的被測樣品，總會有或多或少的丟失。
3、儀器系統(tǒng)部件的磨損物
最后，在HPLC系統(tǒng)中顆粒物的另一個主要來源是輸液泵密封墊和進(jìn)樣閥旋轉(zhuǎn)軸的磨損。關(guān)于輸液泵密封墊的磨損更換有兩種不同建議。
第一種建議認(rèn)為，在一般實(shí)驗(yàn)室中輸液泵密封墊通常使用壽命為六個月到一年，因此建議半年或一年更換這些密封墊，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)基于上述觀點(diǎn)制定定期預(yù)防性維護(hù)計劃。
該觀點(diǎn)認(rèn)為：與輸液泵密封墊顆粒堵塞柱子而更換新柱子的費(fèi)用相比，更換密封墊的費(fèi)用低些。一些輸液泵有玻璃砂芯或篩網(wǎng)，可在流路中濾掉從泵密封墊磨損下來的顆粒物，防止這些顆粒物隨流動相流至柱頭。若有這種裝置應(yīng)查閱輸液泵操作手冊，查看推薦的這種過濾器清洗或更換的間隔。另一種建議則認(rèn)為，原裝密封墊的密封效果最好，更換以后容易引起流動相滲漏。所以，只要不漏液就不要輕易更換密封墊。
三、沖洗
使HPLC系統(tǒng)良好運(yùn)行的第三個要點(diǎn)是保持系統(tǒng)的清潔。你需要關(guān)注流動相流經(jīng)該系統(tǒng)的所有地方，對于這些地方經(jīng)常性的沖洗，將使你的系統(tǒng)保持在“Ready”狀態(tài)。
1、流動相儲液瓶
2、泵
接下來要沖洗的是泵。千萬不要一分析完沖幾分鐘后就停泵，特別是當(dāng)流動相中含有難揮發(fā)的緩沖液（如磷酸鹽）時。如果儀器不是連續(xù)使用，當(dāng)流動相蒸發(fā)時，難揮發(fā)物就會粘在活塞密封墊的表面，難揮發(fā)物將形成固形物沉淀。這是泵密封墊磨損和單向閥滲漏的主要原因之一。所以，無論使用長短，在停泵以前一定要用非緩沖液流動相沖洗泵在半個小時以上，要是流動相中有難揮發(fā)緩沖鹽則建議沖洗的時間應(yīng)該更長些。
3、自動進(jìn)樣器
自動進(jìn)樣器也要按規(guī)定清洗。現(xiàn)在的儀器多配有自動進(jìn)樣器的沖洗液瓶，通常只要注意及時更換、補(bǔ)充沖洗液即可。自動進(jìn)樣器用的洗滌液也要采用與流動相相同的方式處理，并根據(jù)溶劑的有效期和規(guī)定，清洗儲液瓶或更換洗滌液。現(xiàn)在的自動進(jìn)樣器設(shè)置、操作都很簡單，如果時間允許（特別是利用夜間運(yùn)行），每次分析完后設(shè)置進(jìn)1、2針純?nèi)軇ㄈ缂状肌⒁译妫彩且粋�好做法。
4、色譜柱
對柱子的污染是隨使用時間而增加。通常表現(xiàn)是：運(yùn)行走基線時在記錄的色譜圖中基線噪音增加，泵壓也增加。解決這個問題的最有效方法就是在每一批樣品分析結(jié)束后或準(zhǔn)備卸下柱子時用大量的流動相沖洗柱子（例如，甲醇、乙腈和水）。用梯度沖洗效果更好，具體的比例要根據(jù)柱子的說明書和性質(zhì)而定。
5、檢測器
如果是正常使用，檢測器將依據(jù)其性質(zhì)并按照說明書規(guī)定進(jìn)行洗。例如UV/VIS檢測器或FL檢測器，在對柱子和系統(tǒng)進(jìn)行沖洗時也就一同對檢測器流通池中污染物進(jìn)行了清洗。但是蒸發(fā)光檢測器或質(zhì)譜儀則需要按照說明書進(jìn)行定期清洗。這些檢測器在使用時會有難揮發(fā)污染物沉積，如質(zhì)譜儀離子源的噴針、毛細(xì)管、錐孔板、預(yù)四極等部件，因而需要定期清洗。而且對連有這些檢測器的系統(tǒng)沖洗時，最好與這些檢測器斷開，以減少對檢測器的污染。
總之，實(shí)驗(yàn)室日常使用的液相色譜儀要是能認(rèn)真做好這三項(xiàng)工作——脫氣、過濾和沖洗，你的儀器可以得到良好的預(yù)防性維護(hù)，使用時就會感到比較順手。當(dāng)然，在實(shí)際操作時遇到的問題并沒有這么簡單，但這三個良好習(xí)慣將是正確操作、使用HPLC系統(tǒng)的基礎(chǔ)。
