已解決
奶粉/牛奶中的三聚氰胺LC-MS/MS分析
三聚氰胺（melamine，如圖1所示）是作為塑料、涂料等行業(yè)的改性劑。一些違法企業(yè)為提高產(chǎn)品的蛋白質(zhì)含量將其作為偽蛋白質(zhì)非法添加到食品或飼料等產(chǎn)品中。2006年美國FDA有報道，其作為寵物食品的偽蛋白質(zhì)使用，使寵物死亡或生病；并且因為其容易和人體內(nèi)氰脲酸反應(yīng)生成晶體狀聚合物（如圖2所示），而引起結(jié)石等病狀，嚴(yán)重影響人類健康。
圖1 三聚氰胺結(jié)構(gòu)式
圖2 三聚氰胺與氰脲酸結(jié)合示意圖
標(biāo)準(zhǔn)品配制
取50mg三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，以20%甲醇溶解，定容至50mL，得到1000ppm的標(biāo)準(zhǔn)溶液。使用時以提取液稀釋至所需的濃度。
樣品前處理
1．直接提取法：
稱取奶粉樣品5g (或牛奶10mL)，加入24mL乙腈/水溶液（50︰50，V/V）和1mL 1.0mol/L 鹽酸，劇烈振搖30s，在漩渦振蕩器上渦旋 1min，5℃ 4000 r/min離心 5min；取上層清液過0.45μm濾膜上機(jī)測定。
2．SPE凈化法
Bond Elut Plexa PCX
(200mg, 6mL, P/N.12108206 )
活化
5mL甲醇，5mL水
上樣
上述上清液，重力自流上樣
液相色譜分析條件
VARIAN 212 HPLC 儀器
色譜柱： Pursuit C8 4.6 mm×50mm×5μm（P/N:A3030030×046）
流動相：
時間(min) 25mmol/L乙酸銨+25mmol/L乙酸水溶
液/乙腈
0 90% 10%
2.5 5% 95%
4.5 5% 95%
5 90% 10%
7 90% 10%
流 速： 200μl/min
進(jìn)樣量： 10μL
洗脫
5mL 5%氨化甲醇(v/v)洗脫（5mL氨水+95mL甲醇）
淋洗
5mL 0.1mol/L HCl，2mL甲醇，真空抽1min
50℃氮吹干燥20min，95:5乙腈:甲酸銨(20 mmol/L), 定容至1mL，渦旋10s或過0.45μm濾膜，進(jìn)行測定
服務(wù)熱線：800 820 8266
Varian 食品安全應(yīng)用
柱溫： 35℃
MS/MS條件
VARIAN 320-MS 串聯(lián)四極桿LC-MS/MS儀器
離子源： ESI+
Needle voltage： 3.6 kV
Shield voltage: 225 V
Dry gas： 22 psi@300℃
霧化氣： 55 psi
碰撞氣： 氬氣，1.8Torr
MRM 參數(shù)
母離子
子離子
碰撞能量（V）
67.9
21.5
126.9
84.9*
13.5
*為定量離子
結(jié)果與討論
按照以上色譜和質(zhì)譜條件，建立二級質(zhì)譜MRM檢測方法，并將三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品添加到陰性牛奶中，建立1、5、10、50ppb和100ppb濃度范圍內(nèi)校正曲線。三聚氰胺外加標(biāo)離子色譜圖和標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖3和圖4所示。
圖3 陰性牛奶樣品中加標(biāo)1ppb三聚氰胺MRM離子流圖
圖4 三聚氰胺（1、5、10、50ppb和100ppb）濃度
范圍內(nèi)校正曲線
結(jié)論
采用固相萃取-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法檢測牛奶中三聚氰胺，Bond Elut Plexa PCX萃取柱凈化效果良好，串聯(lián)質(zhì)譜MRM方法可以大大提高檢測方法的準(zhǔn)確度，該方法可靠性好，靈敏度高，完全能搞滿足對牛奶和奶制品中的三聚氰胺檢測要求。
三聚氰胺（melamine，如圖1所示）是作為塑料、涂料等行業(yè)的改性劑。一些違法企業(yè)為提高產(chǎn)品的蛋白質(zhì)含量將其作為偽蛋白質(zhì)非法添加到食品或飼料等產(chǎn)品中。2006年美國FDA有報道，其作為寵物食品的偽蛋白質(zhì)使用，使寵物死亡或生病；并且因為其容易和人體內(nèi)氰脲酸反應(yīng)生成晶體狀聚合物（如圖2所示），而引起結(jié)石等病狀，嚴(yán)重影響人類健康。
圖1 三聚氰胺結(jié)構(gòu)式
圖2 三聚氰胺與氰脲酸結(jié)合示意圖
標(biāo)準(zhǔn)品配制
取50mg三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，以20%甲醇溶解，定容至50mL，得到1000ppm的標(biāo)準(zhǔn)溶液。使用時以提取液稀釋至所需的濃度。
樣品前處理
1．直接提取法：
稱取奶粉樣品5g (或牛奶10mL)，加入24mL乙腈/水溶液（50︰50，V/V）和1mL 1.0mol/L 鹽酸，劇烈振搖30s，在漩渦振蕩器上渦旋 1min，5℃ 4000 r/min離心 5min；取上層清液過0.45μm濾膜上機(jī)測定。
2．SPE凈化法
Bond Elut Plexa PCX
(200mg, 6mL, P/N.12108206 )
活化
5mL甲醇，5mL水
上樣
上述上清液，重力自流上樣
液相色譜分析條件
VARIAN 212 HPLC 儀器
色譜柱： Pursuit C8 4.6 mm×50mm×5μm（P/N:A3030030×046）
流動相：
時間(min) 25mmol/L乙酸銨+25mmol/L乙酸水溶
液/乙腈
0 90% 10%
2.5 5% 95%
4.5 5% 95%
5 90% 10%
7 90% 10%
流 速： 200μl/min
進(jìn)樣量： 10μL
洗脫
5mL 5%氨化甲醇(v/v)洗脫（5mL氨水+95mL甲醇）
淋洗
5mL 0.1mol/L HCl，2mL甲醇，真空抽1min
50℃氮吹干燥20min，95:5乙腈:甲酸銨(20 mmol/L), 定容至1mL，渦旋10s或過0.45μm濾膜，進(jìn)行測定
服務(wù)熱線：800 820 8266
Varian 食品安全應(yīng)用
柱溫： 35℃
MS/MS條件
VARIAN 320-MS 串聯(lián)四極桿LC-MS/MS儀器
離子源： ESI+
Needle voltage： 3.6 kV
Shield voltage: 225 V
Dry gas： 22 psi@300℃
霧化氣： 55 psi
碰撞氣： 氬氣，1.8Torr
MRM 參數(shù)
母離子
子離子
碰撞能量（V）
67.9
21.5
126.9
84.9*
13.5
*為定量離子
結(jié)果與討論
按照以上色譜和質(zhì)譜條件，建立二級質(zhì)譜MRM檢測方法，并將三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品添加到陰性牛奶中，建立1、5、10、50ppb和100ppb濃度范圍內(nèi)校正曲線。三聚氰胺外加標(biāo)離子色譜圖和標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖3和圖4所示。
圖3 陰性牛奶樣品中加標(biāo)1ppb三聚氰胺MRM離子流圖
圖4 三聚氰胺（1、5、10、50ppb和100ppb）濃度
范圍內(nèi)校正曲線
結(jié)論
采用固相萃取-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法檢測牛奶中三聚氰胺，Bond Elut Plexa PCX萃取柱凈化效果良好，串聯(lián)質(zhì)譜MRM方法可以大大提高檢測方法的準(zhǔn)確度，該方法可靠性好，靈敏度高，完全能搞滿足對牛奶和奶制品中的三聚氰胺檢測要求。