隨著食用菌產業的蓬勃發展，菌種需要量隨之增加，而現有菌種生產單位明顯偏少，許多菇農不得不向外引種。長途購運菌種不僅花費大，成本高而且菌種因破瓶而易引起雜菌污染，從而嚴重影響栽培食用菌的經濟效益。菇農若能掌握菌種生產程序和制種技術，實行自行制種，逐步發展成制種專業戶，也是一項很好的致富門路。 菌種生產程序，通常分為母種、原種和栽培種3個層次，也就是通常所說的一級、二級、三級菌種。其中母種的分離選育技術性強，要求精化；而原種和栽培種的制作則比較簡單。下面介紹各級菌種的制作技術。

    母種的分離選育

    母種主要采用人工選擇、誘變育種、雜交育種和原生質融合等手段獲得。作為一般制種專業戶，可以采用人工選擇方式分離培育母種，具體步驟與操作方法如下。

    1、采集種源 從野生成人工栽培群體中，選擇有代表性的優良菇體作為種源。種菇的標準是：八成熟，朵形圓正、肉質肥厚，無病蟲害。采集1--2朵符合上述標準的種菇編上號碼，作為分離母種的材料。從栽培室采集的應標有原菌株代號。

    2、培養基配制 瓊脂培養基又叫PDA培養基，常用配方為：馬鈴薯200--250克，瓊脂15--20克，葡萄糖20--25克，清水1000毫升。也可以加硫酸鎂1--1.5克，維生素B1微量，磷酸二氫鉀2--3克。先將馬鈴薯洗凈去皮，切成薄片，置于鋁鍋內加水煮沸30分鐘，撈起后用4層紗布過濾，取汁。然后將瓊脂加入汁內，邊加熱邊攪拌，讓瓊脂充分溶化；再將葡萄糖等加入，稍煮幾分鐘后，同樣用4層紗布過濾，取其汁液。將汁液趁熱裝入玻璃試管內。裝至管長的1/5,管口用棉花塞緊，或將汁液裝入玻璃三角瓶內，裝量20毫升。然后置于高壓鍋內，在98--108千帕/厘米的壓力下滅菌30分鐘左右。滅菌后及時取出，趁熱將試管斜排于桌上，冷卻后即成為固體斜面培養基。

    3、母種分離方法 有孢子彈射、組織分離和基內分離3種方法。①孢子彈射法。將種菇表面消毒，吸干水分后，將菇體懸掛于裝有瓊脂培養基的三角瓶內，讓菇體內的袍子自然散落在培養基上萌發菌絲。也可以剪取一小決菇體，貼附在試管斜面培養基表面，讓孢子散落在培養基上萌發菌絲，即能獲得母種；③組織分離法。將消毒過的種菇，在接種箱內用手從菇柄處對半解開，或用刀片切開，使菇體形成對開。在菌蓋和菌柄交界處或菌褶處，用接種刀切取一小塊菇體，然后縱切成5毫米x10毫米的小薄片，用接種針挑取一塊薄片，接入斜面培養基的中央，每支試管接種一小決薄片，待其萌發菌絲，即可得到母種；（3）基內分離法。選擇已長菇的木段，削去樹皮及表層木質部，用70%的酒精消毒后，鋸成1厘米厚的薄片，放入0.1%的升汞水中消毒1--2分鐘，再用滅菌水洗去殘液。然后再將小薄片劈成0.5--1厘米寬的小條，接入斜面培養基中央，待長出菌絲后即得母種。也可以在已長菇的菌袋中，經消毒處理后，用接種針鉤取袋內色澤純、長勢旺的菌絲體，接種在試管斜面培養基中央，待萌發菌絲后，同樣獲得菌種。

    4、適溫培養 通過上述不同方式將菌種分離接種于試管后，要及時將試管移入已消毒的培養箱或培養室內培養，溫度控制在25℃左右，使分離獲得的孢子或菌絲在適溫下發育。一般孢子彈射3--4天后孢子萌發成菌落，10天后菌絲長滿管；組織分離接種后2--3天，菌絲即萌發，并在培養基上蔓延生長；菇木分離接種后，7天菌絲即恢復生長。

    5、選育提純 通過上述方法得到的菌絲，不一定都是優質的，還需要選育提純。因此，在菌絲萌發后，要認真觀察，挑選色澤純、健壯、長勢正常、無間斷的菌絲，在接種箱內連同培養基鉤取菌絲，接入另備的試管培養基上。在23--25℃的恒溫條件下，培養7--10天，待菌絲長滿管后，再進行觀察，從中擇優取用，即為"母代"母種。

    6、轉管擴接 母代母種可以轉管擴接成"子代"母種。采用同樣的斜面培養基，每支可擴接30--50支子代母種。生產上供應的多為子代母種。它可以再次轉管擴接。一般每支可擴接成20--25支子代母種，但轉管次數不得超過5次。

    7、出菇試驗 分離選育的母種，還必須進行出菇試驗。方法是：把母種接種于瓶或袋裝的木屑培養基上，根據各種菇耳種性對溫度的要求，進行適溫培養，直至出菇才證實可用于生產。

    原種繁殖培養

    將母種接在瓶或袋的木屑培養基上，通過培養，即成原種。其技術要求如下。

    1、原種木屑培養基配方 雜木屑77.5%,麥麩20%,蔗糖1%,石膏粉1.2%,硫酸鎂0.3%.pH值（滅菌前）6.5--7,含水量調至60%.將上述原、輔料混合拌勻，裝入750毫升的玻璃菌種瓶內，裝料要求下松上緊。瓶口塞緊棉花，再用牛皮紙包住瓶頸與棉塞。然后置于高壓滅菌鍋內，在147千帕/平方厘米壓力下滅菌2--2.5小時。也可進行常壓滅菌，在100℃下保持10--11小時，達標后趁熱取出，讓其冷卻。

    2、接入菌種 待料溫降至25℃以下時，在滅菌條件下，將試管種分割成若干決，通過酒精燈火焰迅速接入原種培養基上，每支母種可按4--6瓶原種。

    3、發菌培養 接種后及時將玻璃菌種瓶移入25℃菌種培養室內進行培養。空間相對濕度控制在70℃以上，避免強光照射。原種培養時間一般菇類需要40--50天，草菇、銀耳只需15--20天即可。

    4、去雜選優 原種培育過程中，要每天進行觀察，如發現有雜菌污染的，應立即淘汰。

    栽培種擴大培育

    將原種再次擴接在同樣的木屑培養基上，在適溫條件下培養30--35天即為栽培種（又叫生產種）,可用于生產栽培。栽培種可用750毫升菌種專用瓶，由于使用量大，所以通常多采用聚丙烯菌種袋。袋的規格有12厘米x24厘米、15厘米x28厘米、17厘米x33厘米等，可根據各種菇耳特性和當地習慣選擇使用。培養基滅菌采用常壓滅菌灶滅菌，要求滅菌溫度達100℃，保持8--10小時，達標后趁熱卸袋冷卻。待料溫降至25℃以下時，在無菌條件下接入選定品種的原種。每瓶原種可擴接成50--60瓶栽培種。菌種培育室要求干凈，防強光，室溫掌握在23--25℃，并經常檢查，發現雜菌污染應及時淘汰，不斷選優去劣。當菌絲長滿袋，尖端菌絲反轉上爬1--3厘米時，為適齡的栽培種。