常規制種,其設備昂員,條件要求嚴格,技術也復雜,菌種成本高。建一個菌種廠,設備投資少則上千元,多則幾萬元。簡易制種技術,就是不需要專門設備,利用家里現有條件就可制種。
(一)蒸汽接種法
準備:先把接種操作室打掃干凈,保持潮濕清潔。準備水壺或鋁鍋1只,煤球爐或電爐1只,接種臺1張,接種針或大鑷子一把。蒸料滅菌桶:用鐵皮做成比鋁鍋口徑小一點的圓桶,桶底放鐵篩架,桶內裝菌袋、瓶。上邊口用塑料紙或木蓋封口。
操作:將煤球爐或電爐放在操作臺旁,再將水壺或鋁鍋放在爐子上面,鍋內裝適量的水,接種工具先放在鍋內煮沸消毒。接種時,關好門窗,洗凈雙手,戴上口罩。將菌種塊直接通過蒸汽放入栽培種的培養料上。在蒸汽上接種,既舒服又方便,且接種質量可靠。因為蒸汽在上冒的過程中產生一股沖力,把水壺或鍋上的空氣排開,蒸汽不斷產生,就形成鍋上一片無菌區。由于菌種得到蒸汽的濕潤,比在酒精燈上接的種恢復得更快,污染也少。另外蒸汽接種不使用化學藥品,可避免在接種時藥品對入體的毒害。
(二)代替瓊脂培養基
1.綠豆粉培養基:將新鮮、干燥、不霉變的豆粉隊放入鍋內煮沸調團狀,裝入試管或三角瓶內,塞好棉塞,用 牛皮紙或報紙包扎好試管上部,成捆放于高壓鍋內,用12公斤/厘米2壓力滅菌半小時,然后慢慢放汽,取出試管凝固成斜面即成。
2.麥粒種:將小麥粒用溫水浸泡2小時,撈出放入竹篩內,4個小時燒一次清水,約24小時左右,麥粒就萌發 小芽約1厘米。這時再放火鍋內煮沸半小時,取出用涼水冷卻后,加入石膏、干馬糞使之成散粒,然后分裝試管、三角瓶、蘑菇瓶、雜酒瓶,裝量按常規。塞好棉塞進行滅菌,15磅壓力滅菌1小時。然后接種。 采用此法可節約大量瓊脂;瘜W藥品。
(三)于實體組織分離簡易方法
在無菌環境中,直接切取菇體未形成孢子組織塊,進行 培養即稱簡易分離技術。
方法:在第一批菇中,選取具有該品種特性的、發育正常、菌蓋肥厚、朵大、無病蟲害的子實體作種菇。在蒸汽上用手把子實體一分為二,用消毒過的小刀在萌蓋和菌柄交界處切取一小塊菌肉,移放在斜面培養基中央。分離完后標上菌種導和分離時間,然后培養。
還可將于實體菌柄與菌蓋交界處的菌肉,挑一塊直接放 入滅過菌的原種瓶,培養即可。這種菌種也可直接用于栽培或擴接。
(四)以菇種菇的方法
以菇種菇,就是將子實體直接當菌種栽培。方法是:把培養料按常規栽培要求拌勻后,壓塊,在料塊表面放些子實體(子實體要干凈無污染),子實體上撒一層培養料,蓋上塑料紙即可。注意子實體放入后,不能重壓。在20℃以下的低溫培養。
(五)"U"型音提純菌種
常規提純銀耳伴生菌——香灰菌絲,用試管培養基反復提純,手續繁多且不易提純,我們采用玻璃"口"型管提純香灰菌絲,不用瓊脂培養基,就可得到純的香灰菌絲,其方法:取1—2厘米口徑的玻璃"U"型管數支,裝上木屑培養基,兩端用塑料紙包扎嚴(耐高壓塑料紙),滅菌后,在接種箱內,用接種針挑香灰菌絲前端白色處一點,接于"U"管一端,經培養,菌絲長至另一端后,及時挑取一點放入又一"U"型管內,這樣反復進行提純,可獲得純菌絲。
(六)幾種簡易母種培養基的制作
1.缺少土豆時可用米湯或小麥煮水代替
(1)米湯培養基
煮米飯時在鍋中多加些水;將米湯濾在沒有油污的干凈容器內,取1000毫升,倒在小鍋中,加熱煮沸,加入瓊脂20克,攪拌使之溶化,再加入葡萄糖(如無葡萄糖,加白糖亦可)20克,蛋白胨5克(沒有可不加),維生素B1片(10毫克),待藥物全部溶解后,趁熱倒入漏斗內,分裝試管,裝量為試管長度的 1/4,經 15磅壓力滅菌30分鐘,取出;擺成斜面。平菇菌絲在米湯培養基上的生長速度比在PDA培養基上快1倍左右。
(2)小麥汁培養基
取小麥5斤;淘洗干凈,置鍋中,加水煮沸,煮至小麥膨脹而不裂開,中間無白心為度,過濾后取澄清液1000毫升(不足量可加清水補充),在濾液中加入瓊脂20克,葡萄糖或白糖20克,制備方法同米湯培養基,過濾后的小麥粒加入0.5%碳酸粉和1.5%的石膏粉,可用于制作原種培養基,在小麥汁培養基上先后接種平菇、鳳尾菇、香菇、木耳、金針菇,其長勢均比在PDA培養基強。
2.缺少瓊脂時可用玉米;蛎罪堊髋囵B基
(l)玉米粒培養基
將玉米顆粒用冷水泡脹,沖成綠豆粒大小碎塊或將嫩玉米粒切碎,裝入試管,裝量為試管的 1/3~1/2,用竹筷稍壓緊,然后塞上棉塞,置高壓鍋內,15磅壓力滅菌45分鐘,取出冷卻后即可作為組織分離或轉接菌種的培養基,將組織塊或菌絲接入其中,25℃左右下培養,7~10天菌絲長滿,菌絲體潔白濃密,擴接成原種,長勢亦好。
(2)米飯培養基
將已濾去米湯即將入瓶的米飯分裝入試管內,稍稍壓緊,使米粒成形,塞上棉塞。滅菌、接種,培養同玉米粒培養基。