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載體

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08
載體(Vector)是把外源DNA(目的基因)導(dǎo)入宿主細(xì)胞,使之傳代、擴(kuò)增、表達(dá)的工具。載體有質(zhì)粒(plasmid)、噬菌體、單鏈絲狀噬菌體和粘性末端質(zhì)粒(粘粒)、病毒等。載體具有能自我復(fù)制;有可選擇的,便于篩選、鑒定的遺傳標(biāo)記;有供外源DNA插入的位點(diǎn);本身體積小等特征。
  質(zhì)粒存在于多種細(xì)菌,是染色體(核)以外的獨(dú)立遺傳因子,由雙鏈環(huán)狀DNA組成,幾乎完全裸露,很少有蛋白質(zhì)結(jié)合。質(zhì)粒有嚴(yán)緊型和松弛型之分。嚴(yán)緊型由DNA多聚酶Ⅲ復(fù)制,一個細(xì)胞可復(fù)制1-5個質(zhì)粒。而松弛型由DNA多聚酶Ⅰ復(fù)制,一個細(xì)胞可復(fù)制30-50個質(zhì)粒,如果用氯霉素可阻止蛋白質(zhì)合成,使質(zhì)粒有效利用原料,復(fù)制更多的質(zhì)粒。質(zhì)粒經(jīng)過改造品種繁多,常用的有pBR322、pUC系列等。這些質(zhì)粒都含有多個基本基因,如復(fù)制起動區(qū)(復(fù)制原點(diǎn)Ori),便于復(fù)制擴(kuò)增;抗抗生素標(biāo)記(抗氨芐青霉素Apr、抗四環(huán)素Tcr等)或大腸埃希菌部分乳糖操縱子(E.coli LacZ)等,便于基因重組體的篩選;基因發(fā)動子(乳糖操縱子Lac、色氨酸操縱子Trp等)和轉(zhuǎn)錄終止序列,便于插入的外源基因轉(zhuǎn)錄、翻譯表達(dá)。質(zhì)粒上還有許多限制性內(nèi)切酶的切點(diǎn),即基因插入位點(diǎn),又叫基因重組位點(diǎn),基因克隆位點(diǎn)。
  常用噬菌體載體有單鏈?zhǔn)删wM13系統(tǒng);雙鏈?zhǔn)删w系統(tǒng)。噬菌體應(yīng)和相應(yīng)的宿主細(xì)胞配合使用。以上載體各有特點(diǎn),便于選擇,靈活應(yīng)用。
 
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