1. 細胞生長至高密度時，即須分殖至新的培養瓶中，一般稀釋比例為1:3 至1:6，依細胞
種類而異。
2. 材料：
2.1. 無菌磷酸生理緩沖液(Dulbecco’s phosphate-buffered saline, Ca /Mg free, D-PBS,
GibcoBRL 21600-010)
2.2. trypsin-EDTA solution (0.05% trypsin-0.53mM EDTA-4Na, GibcoBRL 25300-062)：
以10 ml 分裝于15 ml 無菌離心管中，保存于–20 oC，使用前放在37 oC 水槽回溫。
2.3. 新鮮培養基
2.4. 無菌吸管/離心管/培養瓶
3. 步驟：
3.1. 附著型胞(adherent cell)
3.1.1. 吸掉舊培養液。
3.1.2. 用D-PBS 洗滌細胞一至二次。
3.1.3. 加入trypsin-EDTA 溶液(1ml/25cm2, 2ml/75cm2)，37 oC 作用數分鐘，于倒立顯微鏡下觀察，當細胞將要分離而呈現圓粒狀時，吸掉trypsin-EDTA 溶液。(若不移去trypsin-EDTA，則在trypsin-EDTA 作用后，加入適量含血清之新鮮培養基終止trypsin 作用，離心后再吸掉上清液。)
3.1.4. 輕拍培養瓶使細胞自瓶壁脫落，加入適量之新鮮培養基，以吸管上下吸放數次以打散細胞團塊，混和均勻后，依稀釋比例轉移至新的培養瓶中，以正常培養條件培養。
3.2. 懸浮型細胞(suspension cell)
3.2.1. 吸出細胞培養液，放入離心管中，離心1000 rpm 5 分鐘。
3.2.2. 吸掉上清液，加入適量之新鮮培養基，混和均勻后，依稀釋比例轉移至新的培養瓶中，以正常培養條件培養。
3.3. 融合瘤(hybridoma)
3.3.1. 有些hybridoma cell 需培養三天以上才會產生抗體，若是更換培養基，則可能會失去抗體。因此繼代培養不需離心后更換培養基，直接添加新鮮培養基稀釋細胞濃度即可。若體積太大，可傾斜放置，或分殖至新培養瓶中。