1.離心收集細(xì)胞,PBS洗1~2次
2.1%多聚甲醛低溫下固定15min。
3.3ml PBS洗1次,70%乙醇固定,冰箱內(nèi)放置1~3天。
4.PBS輕洗1次。
5.2×105細(xì)胞與12.5μl的缺口平移緩沖液在15℃共孵育6h,每過15min振動(dòng)1次。
6.PBS輕洗1次。
7.細(xì)胞在黑暗中37℃與100μl的染色緩沖液孵育30min。
8.含0.1% Triton-X 100的PBS輕洗1次。
9.1ml PBS(含5mg/ml PI, 0.1% RNase A)重懸。
10.流式細(xì)胞儀分析紅色(PI)對綠色熒光(FITC)的地形圖。
2.1%多聚甲醛低溫下固定15min。
3.3ml PBS洗1次,70%乙醇固定,冰箱內(nèi)放置1~3天。
4.PBS輕洗1次。
5.2×105細(xì)胞與12.5μl的缺口平移緩沖液在15℃共孵育6h,每過15min振動(dòng)1次。
6.PBS輕洗1次。
7.細(xì)胞在黑暗中37℃與100μl的染色緩沖液孵育30min。
8.含0.1% Triton-X 100的PBS輕洗1次。
9.1ml PBS(含5mg/ml PI, 0.1% RNase A)重懸。
10.流式細(xì)胞儀分析紅色(PI)對綠色熒光(FITC)的地形圖。