1.基本原理所謂平衡飽和,是指抗原和抗體反應達到再不結合,也不解離的平衡狀態,稱為飽和狀態,即平衡飽和。所以,有人稱此為飽和分析法。這意味著抗原或被測抗原、標記抗原、抗體三者一起溫育。
2.加樣程序一般先加標準物或被測樣品,再加抗血清,最后加標記物。這樣的順序是讓標準物或被測物與抗體有短暫的結合,提高抗原的競爭抑制能力。
在小分子半抗原的放射免疫分析中,標記抗原和未標記抗原與抗體結合的親合力常常是不相同的,前者比后者的親合力高。因此,上述加樣程序就更有必要,所以一般都采用先加標準物或樣品和抗血清,后加標記物。這樣測定也比較穩定。
在大分子蛋白質抗原的放射免疫分析中,如果是雙抗體分離法,抗原和標記抗原與抗體三者加樣,可不分先后,有的是標準物、標記物、抗血清的加樣順序,但一般習慣還是標準物或血樣、抗血清、標記物、然后混勻溫育24~48h,再加雙抗體,繼續溫育24h,使免疫反應達到平衡。對一些多肽激素的放射免疫分析,應用雙抗體分離法,其流程比較長,這樣的順序同樣可不分先后。
以大鼠垂體、下丘腦β-內啡肽RIA測定程序為例:
。1)加樣(單位μl;總反應體積500μl)
(2)孵育:4℃,24h
(3)分離B與F:每管加入2%加膜活性炭溶液300μl,搖勻,立即離心,去上清,測沉淀(F)的CPM數。