1．酶標抗體的制備
2．取材 將培養細胞或懸浮細胞用0.1Mol/L PBS液沖洗，離心沉淀后，立即轉入固定液(2%甲醛液或2%戊二醛液均可)pH 7.2，4℃固定5min～30min(依抗原性質所定)。如病料為組織塊，則取適當大小，先固定1h然后取出，以新的雙面刀片切成50～100µm的薄組織再行固定1h～2h。
3．漂洗 以PBS液漂洗過夜，換液3～4次。
4．血清孵育，25℃1h或4℃過夜，孵育的標本放置于加蓋的瓷盤內，底層墊數層紗布。防止抗血清干燥凝固，不易洗脫，造成非特異性吸附。
5．PBS沖洗3～4次，每次10min。
6．2.5%戊二醛再固定15min～30min。
7．PBS液沖洗3～4次每次10min。
8．酶標記抗體孵育；用適當稀釋的酶標抗體(即工作濃度)于25℃濕盆內孵育1h或4℃過夜。
9．PBS液沖洗3～4次每次10min或4℃漂洗過夜。
10．酶顯色處理 將漂洗后的標本浸入DAB－H2O2底物溶液中，20℃，10min～30min。顯色強弱與戊二醛的固定有關。若顯色弱則可減少甚至取消戊二醛的固定時間。沖洗時必須注意防止非特異漂浮的沉積。
11．常規包埋、切片、電鏡觀察 在經過脫水包埋確定抗原性不致引起失活的前提下可在包埋切片后做標記染色，切片一般在2µm～4µm，切片后染色不存在通透困難的問題。無論在標記染色后切片還是在切片后標記染色，最好在光鏡下定位選擇后，再做電鏡定位包埋，這樣目的性強，可減少工作量。