膠體金標記技術由于標記物的制備簡便,方法敏感、特異,不需要使用放射性同位素,或有潛在致癌物質的酶顯色底物,也不要熒光顯微鏡,它的應用范圍廣,除應用于光鏡或電鏡的免疫組化法外,更廣泛地應用于各種液相免疫測定和固相免疫分析以及流式細胞術等。
1.液相免疫測定:將膠體金與抗體結合,建立微量凝集試驗檢測相應的抗原,如間接血凝一樣,用肉眼可直接觀察到凝集顆粒。利用免疫學反應時金顆粒凝聚導致顏色減退的原理,建立均相溶膠顆粒免疫測定法(Sol particle immunoassay ,SPIA)已成功地應用于PCG的檢測,直接應用分光光度計進行定量分析。
2.金標記流式細胞術:膠體金可以明顯改變紅色激光的散射角,利用膠體金標記的羊抗鼠Ig抗體應用于流式細胞術,分析不同類型細胞的表面抗原,結果膠體金標記的細胞在波長632nm時,90度散射角可放大10倍以上,同時不影響細胞活性。而且與熒光素共同標記,彼此互不干擾。
3.膠體金固相免疫測定法
(1)斑點免疫金銀染色法(Dot-IGS/IGSS)是將斑點ELISA與免疫膠體金結合起來的一種方法。將蛋白質抗原直接點樣在硝酸纖維膜上,與特異性抗體反應后,再滴加膠體金標記的第二抗體,結果在抗原抗體反應處發生金顆粒聚集,形成肉眼可見的紅色斑點,此稱為斑點免疫金染色法(Dot-IGS)。此反應可通過銀顯影液增強,即斑點金銀染色法(Dot-IGS/IGSS)。
(2)斑點金免疫滲濾測定法(dot immuno-gold filtration assay,DIGFA)此法原理完全同斑點免疫金染色法,只是在硝酸纖維膜下墊有吸水性強的墊料,即為滲濾裝置。在加抗原(抗體)后,迅速加抗體(抗原),再加金標記第二抗體,由于有滲濾裝置,反應很快,在數分鐘內即可顯出顏色反應。此方法已成功地應用于人的免疫缺陷病病毒(HIV)的檢查和人血清中甲胎蛋白的檢測。