免疫金電鏡技術(shù)現(xiàn)已在免疫化學(xué)和組織化學(xué)研究中得到了廣泛應(yīng)用、其所以能成為電鏡下較為理想的免疫標(biāo)記物主要有如下優(yōu)勢(shì):(1)膠體金顆粒在電鏡下具有很高的電子密度,大小顆粒清晰可辨,且不影響對(duì)原有超微結(jié)構(gòu)的觀察.(2)通過(guò)計(jì)量被檢部分金顆粒,可以對(duì)被檢抗原或抗體進(jìn)行免疫定量研究.(3)采用不同直徑的金標(biāo)抗體進(jìn)行免疫雙重或多重標(biāo)記染色,能在一張電鏡圖片上同時(shí)顯示兩種或多種被檢測(cè)物質(zhì)的組織或細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu).
常用的膠體金探針可以是金標(biāo)記的第一抗體(McAb或PcAb)、第二抗體、SPA及生物素。根據(jù)需要,有時(shí)也應(yīng)用植物血凝素和酶類. 金標(biāo)技術(shù)在電鏡水平的應(yīng)用,主要方法包括:包埋前染色、包埋后染色、免疫負(fù)染色、雙標(biāo)記技術(shù)和原位雜交技術(shù)等。
實(shí)驗(yàn)證明,該法樣本用量少、檢測(cè)速度快、對(duì)比明顯、操作簡(jiǎn)便、敏感性和特異性高,既可用于抗原檢測(cè),也可用于抗體檢測(cè)。因此,可同時(shí)適用于科研和診斷.
以下是一些近年來(lái)免疫金電鏡方面的研究進(jìn)展:
(1)免疫不育研究的關(guān)鍵,是尋找與不育相關(guān)的精子抗原及其抗體.有人應(yīng)用免疫金標(biāo)記法對(duì)51KD精于膜抗原的抗體在精子上的定位進(jìn)行了超微結(jié)構(gòu)觀察,免疫電鏡染色采用包埋前染色法.電鏡觀察見(jiàn)精子的頭、頸、體及尾部結(jié)構(gòu)清晰,細(xì)胞器豐富.經(jīng)含有抗51KD抗體(AsAb)陽(yáng)性血清標(biāo)記的精子,在其頂體、頂體后區(qū)、胞膜和胞漿部位均見(jiàn)有金顆粒存在;而不含抗51KD抗體(AsAb)陽(yáng)性血清標(biāo)記的精子,除精于頂體、胞膜和胞漿部位有金顆粒外,其余部位均未見(jiàn)金顆粒標(biāo)記。電鏡觀察結(jié)果顯示,含抗51KD抗體的陽(yáng)性血清作用于精子后,經(jīng)免疫金探針標(biāo)記,精子頂體后區(qū)出現(xiàn)金顆粒,說(shuō)明51KD精子抗原定位于頂體后區(qū),而頂體后區(qū)是精子十分重要的功能區(qū),該區(qū)域抗原很少,提示此抗體可能與不育關(guān)系密切.該研究應(yīng)用免疫金標(biāo)記法,進(jìn)行了抗51KD抗體在精子的免疫電鏡定位,并獲得較為滿意的結(jié)果.為與男性不育相關(guān)的精子抗原及其抗體的研究提供了可行方法,對(duì)男性不育癥患者的診斷及治療提供了可靠依據(jù)。
(2)通過(guò)免疫電子顯微鏡可以觀察到,喹啉衍生物(QUIN)在人體細(xì)胞代謝中的重要作用.銀增強(qiáng)的膠體金方法結(jié)合電鏡用于免疫分析測(cè)定細(xì)胞中的QUIN可獲得很好的效果,金顆粒的數(shù)目代表了QUIN免疫活性.隨著QUIN濃度水平的提高,金顆粒的標(biāo)記位置不變而數(shù)目相應(yīng)的增加.
(3)Annexin VI是一種在老鼠肝臟細(xì)胞中對(duì)肝生理活動(dòng)起重要作用的蛋白質(zhì),經(jīng)過(guò)雙重膠體金標(biāo)記老鼠肝臟超薄切片上的抗annexin VI抗體可定量檢測(cè)annexin VI,標(biāo)記效率是80%.這樣annexin VI成為第一個(gè)已知的參與肝細(xì)胞受體循環(huán)和轉(zhuǎn)運(yùn)的結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì).
(4)通過(guò)膠體金免疫電鏡分析兔子十二指腸上皮細(xì)胞不同位置處的胃動(dòng)素和血液中的復(fù)合胺表明,與復(fù)合胺反應(yīng)的膠體金集中在分泌腺的顆粒上,而與胃動(dòng)素反應(yīng)的膠體金在顆粒外部,表明這兩種物質(zhì)不是處在同一位置.
(5)免疫金電鏡分析進(jìn)行蛋白質(zhì)定位研究,例如青蛙卵母細(xì)胞核酸包膜中端粒結(jié)合蛋白質(zhì)的定位研究.
(6)BSP(Bone sialoprotein)和OPN(osteopontin)是膠原礦化組織中兩種主要的非膠狀蛋白質(zhì),可利用膠體金對(duì)細(xì)胞進(jìn)行包埋處理,來(lái)跟蹤上述物質(zhì),來(lái)分析其在生命活動(dòng)中的作用.
(7)膠體金標(biāo)記、高分辨掃描電子顯微鏡研究皰疹病毒和被感染細(xì)胞表面的病毒單一糖蛋白,發(fā)現(xiàn)用非包層的方法來(lái)標(biāo)記的觀察效果要優(yōu)于傳統(tǒng)的包層方法.
(8)膠體金不但可以測(cè)定血清中的免疫球蛋白,還可以測(cè)定鳥(niǎo)類蛋黃中的免疫球蛋白,已經(jīng)實(shí)驗(yàn)過(guò)的抗原有乙肝表面抗原、馬鈴薯病毒和細(xì)菌多聚糖等.