（一）溶劑分離法：一般是將總提取物，選用三、四種不同極性的溶劑，由低極性到高極性分步進行提取分離。水浸膏或乙醇浸膏常常為膠伏物，難以均勻分散在低極性溶劑中，故不能提取完全，可拌人適量惰性填充劑，如硅藻土或纖維粉等，然后低溫或自然干燥，粉碎后，再以選用溶劑依次提取，使總提取物中各組成成分，依其在不同極性溶劑中溶解度的差異而得到分離。例如粉防己乙醇浸膏，堿化后可利用乙醚溶出脂溶性生物堿，再以冷苯處理溶出粉防己堿，與其結構類似的防己諾林堿比前者少一甲基而有一酚羥基，不溶于冷苯而得以分離。利用中草藥化學成分，在不同極性溶劑中的溶解度進行分離純化，是最常用的方法。

　　廣而言之，自中草藥提取溶液中加入另一種溶劑，析出其中某種或某些成分，或析出其雜質，也是一種溶劑分離的方法。中草藥的水提液中常含有樹膠、粘液質、蛋白質、糊化淀粉等，可以加入一定量的乙醇，使這些不溶于乙醇的成分自溶液中沉淀析出，而達到與其它成分分離的目的。例如自中草藥提取液中除去這些雜質，或自白及水提取液中獲得白及膠，可采用加乙醇沉淀法；自新鮮括樓根汁中制取天花粉素，可滴人丙酮使分次沉淀析出。目前，提取多糖及多肽類化合物，多采用水溶解、濃縮、加乙醇或丙酮析出的辦法。

　　此外，也可利用其某些成分能在酸或堿中溶解，又在加堿或加酸變更溶液的pH后，成不溶物而析出以達到分離。例如內酯類化合物不溶于水，但遇堿開環生成羧酸鹽溶于水，再加酸酸化，又重新形成內酯環從溶液中析出，從而與其它雜質分離；生物堿一般不溶于水，遇酸生成生物堿鹽而溶于水，再加堿堿化，又重新生成游離生物堿。這些化合物可以利用與水不相混溶的有機溶劑進行萃取分離。一般中草藥總提取物用酸水、堿水先后處理，可以分為三部分：溶于酸水的為堿性成分（如生物堿），溶于堿水的為酸性成分（如有機酸），酸、堿均不溶的為中性成分（如甾醇）。還可利用不同酸、堿度進一步分離，如酸性化臺物可以分為強酸性、弱酸性和酷熱酚性三種，它們分別溶于碳酸氫鈉、碳酸鈉和氫氧化鈉，借此可進行分離。有些總生物堿，如長春花生物堿、石蒜生物堿，可利用不同rH值進行分離。但有些特殊情況，如酚性生物堿紫董定堿（corydine）在氫氧化鈉溶液中仍能為乙醚抽出，蝙蝠葛堿（dauricins）在乙醚溶液中能為氫氧化鈉溶液抽出，而溶于氯仿溶液中則不能被氫氧化鈉溶液抽出；有些生物堿的鹽類，如四氫掌葉防己堿鹽酸鹽在水溶液中仍能為氯仿抽出。這些性質均有助于各化合物的分離純化。

　　（二）兩相溶劑萃取法：

　　1．萃取法：兩相溶劑提取又簡稱萃取法，是利用混合物中各成分在兩種互不相溶的溶劑中分配系數的不同而達到分離的方法。萃取時如果各成分在兩相溶劑中分配系數相差越大，則分離效率越高、如果在水提取液中的有效成分是親脂性的物質，一般多用親脂性有機溶劑，如苯、氯仿或乙醚進行兩相萃取，如果有效成分是偏于親水性的物質，在親脂性溶劑中難溶解，就需要改用弱親脂性的溶劑，例如乙酸乙酯、丁醇等。還可以在氯仿、乙醚中加入適量乙醇或甲醇以增大其親水性。提取黃酮類成分時，多用乙酸乙脂和水的兩相萃取。提取親水性強的皂甙則多選用正丁醇、異戊醇和水作兩相萃取。不過，一般有機溶劑親水性越大，與水作兩相萃取的效果就越不好，因為能使較多的親水性雜質伴隨而出，對有效成分進一步精制影響很大。

　　兩相溶劑萃取在操作中還要注意以下幾點：

　　1）先用小試管猛烈振搖約1分鐘，觀察萃取后二液層分層現象。如果容易產生乳化，大量提取時要避免猛烈振搖，可延長萃取時間。如碰到乳化現象，可將乳化層分出，再用新溶劑萃取；或將乳化層抽濾，或將乳化層稍稍加熱；或較長時間放置并不時旋轉，令其自然分層。乳化現象較嚴重時，可以采用二相溶劑逆流連續萃取裝置。

　　2） 水提取液的濃度最好在比重1．1～1．2之間，過稀則溶劑用量太大，影響操作。

　　3） 溶劑與水溶液應保持一定量的比例，第一次提取時，溶劑要多一些，一般為水提取液的1/3，以后的用量可以少一些，一般1/4-1/6。

　　4）一般萃取3～4次即可。但親水性較大的成分不易轉入有機溶劑層時，須增加萃取次數，或改變萃取溶劑。

　　萃取法所用設備，如為小量萃取，可在分液漏斗中進行；如系中量萃取，可在較大的適當的下口瓶中進行。在工業生產中大量萃取，多在密閉萃取罐內進行，用攪拌機攪拌一定時間，使二液充分混合，再放置令其分層；有時將兩相溶液噴霧混含，以增大萃取接觸，提高萃取效率，也可采用二相溶劑逆流連續萃取裝置。

　　2．逆流連續萃取法：是一種連續的兩相溶劑萃取法。其裝置可具有一根、數根或更多的萃取管。管內用小瓷圈或小的不銹鋼絲圈填充，以增加兩相溶劑萃取時的接觸面。例如用氯仿從川楝樹皮的水浸液中萃取川楝素。將氯仿盛于萃取管內，而比重小于氯仿的水提取濃縮液貯于高位容器內，開啟活塞，則水浸液在高位壓力下流入萃取管，遇瓷圈撞擊而分散成細粒，使與氯仿接觸面增大，萃取就比較完全。如果一種中草藥的水浸液需要用比水輕的苯、乙酸乙酯等進行萃取，則需將水提濃縮液裝在萃取管內，而苯、乙酸乙酯貯于高位容器內。萃取是否完全，可取樣品用薄層層析、紙層析及顯色反應或沉淀反應進行檢查。

　　3．逆流分配法（CounterCurrentDistribution，CCD）：逆流分配法又稱逆流分溶法、逆流分布法或反流分布法。逆流分配法與兩相溶劑逆流萃取法原理一致，但加樣量一定，并不斷在一定容量的兩相溶劑中，經多次移位萃取分配而達到混合物的分離。本法所采用的逆流分布儀是由若干乃至數百只管子組成。若無此儀器，小量萃取時可用分液漏斗代替。預先選擇對混合物分離效果較好，即分配系數差異大的兩種不相混溶的溶劑。并參考分配層析的行為分析推斷和選用溶劑系統，通過試驗測知要經多少次的萃取移位而達到真正的分離。逆流分配法對于分離具有非常相似性質的混合物，往往可以取得良好的效果。但操作時間長，萃取管易因機械振蕩而損壞，消耗溶劑亦多，應用上常受到一定限制。

　　4．液滴逆流分配法：液滴逆流分配法又稱液滴逆流層析法。為近年來在逆流分配法基礎上改進的兩相溶劑萃取法。。對溶劑系統的選擇基本同逆流分配法，但要求能在短時間內分離成兩相，并可生成有效的液滴。由于移動相形成液滴，在細的分配萃取管中與固定相有效地接觸、摩擦不斷形成新的表面，促進溶質在兩相溶劑中的分配，故其分離效果往往比逆流分配法好。且不會產生乳化現象，用氮氣壓驅動移動相，被分離物質不會因遇大氣中氧氣而氧化。本法必須選用能生成液滴的溶劑系統，且對高分子化合物的分離效果較差，處理樣品量小（1克以下），并要有一定設備。應用液滴逆流分配法曾有效地分離多種微量成分如柴胡皂甙原小檗堿型季銨堿等。液滴逆流分配法的裝置，近年來雖不斷在改進，但裝置和操作較繁。目前，對適用于逆流分配法進行分離的成分，可采用兩相溶劑逆流連續萃取裝置或分配柱層析法進行。

　　（三）沉淀法：是在中草藥提取液中加入某些試劑使產生沉淀，以獲得有效成分或除去雜質的方法。

　　1． 鉛鹽沉淀法：鉛鹽沉淀法為分離某些中草藥成分的經典方法之一。由于醋酸鉛及堿式醋酸鉛在水及醇溶液中，能與多種中草藥成分生成難溶的鉛鹽或絡鹽沉淀，故可利用這種性質使有效成分與雜質分離。中性醋酸鉛可與酸性物質或某些酚性物質結合成不溶性鉛鹽。因此，常用以沉淀有機酸、氨基酸、蛋白質、粘液質、鞣質、樹脂、酸性皂甙、部分黃酮等。可與堿式醋酸鉛產生不溶性鉛鹽或絡合物的范圍更廣。通常將中草藥的水或醇提取液先加入醋酸鉛濃溶液，靜置后濾出沉淀，并將沉淀洗液并入濾液，于濾液中加堿式醋酸鉛飽和溶液至不發生沉淀為止，這樣就可得到醋酸鉛沉淀物、堿式醋酸鉛沉淀物及母液三部分。

　　然后將鉛鹽沉淀懸浮于新溶劑中，通以硫化氫氣體，使分解并轉為不溶性硫化鉛而沉淀。含鉛鹽母液亦須先如法脫鉛處理，再濃縮精制。硫化氫脫鉛比較徹底，但溶液中可能存有多余的硫化氫，必須先通人空氣或二氧化碳讓氣泡帶出多余的硫化氫氣體，以免在處理溶液時參與化學反應。新生態的硫化鉛多為膠體沉淀，能吸咐藥液中的有效成分，要注意用溶劑處理收回。脫鉛方法，也可用硫酸、磷酸、硫酸鈉、磷酸鈉等除鉛，但硫酸鉛、磷酸鉛在水中仍有一定的溶解度，除鉛不徹底。用陽離子交換樹脂脫鉛快而徹底，但要注意藥液中某些有效成分也可能被交換上去，同時脫鉛樹脂再生也較困難。還應注意脫鉛后溶液酸度增加，有時需中和后再處理溶液，有時可用新制備的氫氧化鉛、氫氧化鋁、氫氧化銅或碳酸鉛、明礬等代替醋酸鉛、堿式醋酸鉛。例如在黃芩水煎液中加入明礬溶液，黃芩甙就與鋁鹽絡合生成難溶于水的絡化物而與雜質分離，這種絡化物經用水洗凈就可直接供藥用。

　　2． 試劑沉淀法：例如在生物堿鹽的溶液中，加入某些生物堿沉淀試劑（見生物堿性質下），則生物堿生成不溶性復鹽而析出。水溶性生物堿難以用萃取法提取分出，常加入雷氏銨鹽使生成生物堿雷氏鹽沉淀析出。又如橙皮甙、蘆丁、黃芩甙、甘草皂甙均易溶于堿性溶液，當加入酸后可使之沉淀析出。某些蛋白質溶液，可以變更溶液的pH值利用其在等電點時溶解度最小的性質而使之沉淀析出。此外，還可以用明膠、蛋白溶液沉淀鞣質；膽甾醇也常用以沉淀洋地黃皂甙等。可根據中草藥有效成分和雜質的性質，適當選用。

　　（四）鹽析法：鹽析法是在中草藥的水提液中、加入無機鹽至一定濃度，或達到飽和狀態，可使某些成分在水中的溶解度降低沉淀析出，而與水溶性大的雜質分離。常用作鹽析的無機鹽有氯化鈉、硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸銨等。例如三七的水提取液中加硫酸鎂至飽和狀態，三七皂甙乙即可沉淀析出，自黃藤中提取掌葉防己堿，自三顆針中提取小檗堿在生產上都是用氯化鈉或硫酸按鹽析制備。有些成分如原白頭翁素、麻黃堿、苦參堿等水溶性較大，在提取時，亦往往先在水提取液中加入一定量的食鹽，再用有機溶劑萃取。

　　（五）透析法：透析法是利用小分子物質在溶液中可通過半透膜，而大分子物質不能通過半透膜的性質，達到分離的方法。例如分離和純化皂甙、蛋白質、多肽、多糖等物質時，可用透析法以除去無機鹽、單糖、雙糖等雜質。反之也可將大分子的雜質留在半透膜內，而將小分子的物質通過半透膜進入膜外溶液中，而加以分離精制：透析是否成功與透析膜的規格關系極大。透析膜的膜孔有大有小，要根據欲分離成分的具體情況而選擇。透析膜有動物性膜、火棉膠膜、羊皮紙膜（硫酸紙膜）、蛋白質膠膜、玻璃紙膜等。油常多用市售的玻璃紙或動物性半透膜扎成袋狀，外面用尼龍網袋加以保護，小心加入欲透析的樣品溶液，懸掛在清水容器中。經常更換清水使透析膜內外溶液的濃度差加大，必要時適當加熱，并加以攪拌，以利透析速度加快。為了加快透析速度，還可應用電透析法，即在半在半透膜旁邊純溶劑兩端

　　放置二個電極，接通電路，則透析膜中的帶有正電荷的成分如無機陽離子、生物堿等向陰極移動，而帶負電共荷的成分如無機陰離子、有機酸等則向陽極移動，中性化合物及高分子化合物則留在透析膜中。透析是否完全，須取透析膜內溶液進行定性反應檢查。

　　一般透析膜可以自制：動物半透膜如豬、牛的膀胱膜、用水洗凈，再以乙醚脫脂，，即可供用；羊皮紙膜可將濾紙浸入50％的硫酸15～60分鐘，取出鋪在板上，以水沖洗制得。其膜孔大小與硫酸濃度、浸泡時間以及用水沖洗速度有關；火棉膠膜系將火棉膠溶于乙醚及無水乙醇，涂在板上，干后放置水中即可供用，其膜孔大小與溶劑種類、溶劑揮發速度有關，溶劑中加入適量水可使膜孔增大，加入少量醋酸可使膜孔縮小；蛋白質膠（明膠）膜可用20％明膠涂于細布上，陰干后放水中，再加甲醛使膜凝固，沖洗干凈即可供用。近來商品有透析膜管成品出售，國外習稱“ViskingDialysisTubing”，有各種大小厚度規格，可供不同大小分子量的多糖、多肽透析時選用。

　　（六）結晶、重結晶和分步結晶法：鑒定中草藥化學成分，研究其化學結構，必須首先將中草藥成分制備成單體純品。在常溫下，物質本身性質是液體的化臺物，可分別用分餾法或層析法進行分離精制。一般他說，中草藥化學成分在常溫下多半是固體的物質，都具有結晶他的通性，可以根據溶解度的不同用結晶法來達到分離精制的目的。研究中草藥化學成分時，一旦獲得結晶，就能有效地進一步精制成為單體純品。純化臺物的結晶有一定的熔點和結晶學的特征，有利于鑒定。如果鑒定的物質不是單體純品，不但不能得出正確的結論，還會造成工作上的浪費。因此，求得結晶并制備成單體純品，就成為鑒定中草藥成分、研究其分子結構重要的一步。

　　1．雜質的除去：中草藥經過提取分離所得到的成分，大多仍然含有雜質，或者是混合成分。有時即使有少量或微量雜質存在，也能阻礙或延緩結晶的形成。所以在制備結晶時，必須注意雜質的干擾，應力求盡可能除去。有時可選用溶劑溶出雜質，或只溶出所需要的成分。有時可用少量活性炭等進行脫色處理，以除去有色雜質。有時可通過氧化鋁，硅膠或硅藻土短柱處理后，再進行制備結晶。但應用吸附劑除去雜質時，要注意所需要的成分也可能被吸附而損失。此外，層析法更是分離制備單體純品所常用的有效方法。

　　如果一再處理仍未能使近于純品的成分結晶化，則可先制備其晶態的衍生物，再回收原物，可望得到結晶。例如游離生物堿可制備各種生物堿鹽類，羥基化合物可轉變成乙酸化物，碳基化臺物可制備成苯蹤衍生物結晶。美登堿在原料中含量少，且反復分離精制難以得到結晶，但制備成3一滇丙基美登堿結晶后，再經水解除去澳丙基，美登堿就能制備成為結晶。

　　2．溶劑的選擇；制備結晶，要注意選擇合宜的溶劑和應用適量的溶劑。合宜的溶劑，最好是在冷時對所需要的成分溶解度較小，而熱時溶解度較大。溶劑的沸點亦不宜太高。一般常用甲醇、丙酮、氯仿、乙醇、乙酸乙醋等。但有些化合物在一般溶劑中不易形成結晶，而在某些溶劑中則易于形成結晶。例如葛根素、逆沒食子酸（ellagicacid）在冰醋酸中易形成結晶，大黃素（emodin）在吡啶中易于結晶，萱草毒素（hemerocallin）在N，N一二甲基甲酞胺（DMF）中易得到結晶，而穿心蓮亞硫酸氫鈉加成物在丙酮一水中較易得到結晶。又如蝙蝠葛堿通常為無定形粉未，但能和氯仿或乙醚形成為加成物結晶。

　　3．結晶溶液的制備：制備結晶的溶液，需要成為過飽和的溶液。一般是應用適量的溶劑在加溫的情況下，將化合物溶解再放置冷處。如果在室溫中可以析出結晶，就不一定放置于冰箱中，以免伴隨結晶析出更多的雜質。

　　“新生態”的物質即新游離的物質或無定形的粉未狀物質，遠較晶體物質的溶解度大，易于形成過飽和溶液。一般經過精制的化合物，在蒸去溶劑抽松為無定形粉未時就是如此，有時只要加入少量溶劑，往往立即可以溶解，稍稍放置即能析出結晶。例如長春花總弱堿部分抽松后加入1．5倍量的甲醇溶解，放置后很訣析出長春堿結晶。又如蝙蝠葛堿在乙醚中很難溶解，但當其鹽的水溶液用氨液堿化，并立即用乙醚萃取，所得的乙醚溶液，放置后即可析出蝙蝠葛堿的乙醚加成物結晶。

　　制備結晶溶液，除選用單一溶劑外，也常采用混合溶劑。一般是先將化合物溶于易溶的溶劑中，再在室溫下滴加適量的難溶的溶劑，直至溶液微呈渾濁，并將此溶液微微加溫，使溶液完全澄清后放置。例如J一細辛醚重結晶時，可先溶于乙醇，再滴加適量水，即可析出很好的結晶。又如自虎杖中提取水溶性的虎杖甙時，在已精制飽和的水溶液上添加一層乙醚放置，既有利于溶出其共存的脂溶性雜質，又可降低水的極性，促使虎杖俄的結晶化。自秦皮中提取七葉甙（秦皮甲素），也可運用這樣的辦法。

　　結晶過程中，一般是溶液濃度高，降溫訣，析出結晶的速度也快些。但是其結晶的顆粒較小，雜質也可能多些。有時自溶液中析出的速度太快，超過化合物晶核的形成勸分子定向排列的速度，往往只能得到無定形粉未。有時溶液太濃，粘度大反而不易結晶化。如果溶液濃度適當，溫度慢慢降低，有可能析出結晶較大而純度較高的結晶。有的化合物其結晶的形成需要較長的時間，例如鈴蘭毒甙等，有時需放置數天或更長的時間。

　　4．制備結晶操作：制備結晶除應注意以上各點外，在放置過程中，最好先塞緊瓶塞，避免液面先出現結晶，而致結晶純度較低。如果放置一段時間后沒有結晶析出，可以加入極微量的種晶，即同種化合物結晶的微小顆粒。加種晶是誘導晶核形成常用而有效的手段。一般他說，結晶化過程是有高度選擇性的，當加入同種分子或離子，結晶多會立即長大。而且溶液中如果是光學異構體的混合物，還可依種晶性質優先析出其同種光學異構體。沒有種晶時，可用玻璃棒蘸過飽和溶液一滴，在空氣中任溶劑揮散，再用以磨擦容器內壁溶液邊緣處，以誘導結晶的形成。如仍無結晶析出，可打開瓶塞任溶液逐步揮散，慢慢析晶。或另選適當溶劑處理，或再精制一次，盡可能除盡雜質后進行結晶操作。

　　5．重結晶及分步結晶：在制備結晶時，最好在形成一批結晶后，立即傾出上層溶液，然后再放置以得到第二批結晶。晶態物質可以用溶劑溶解再次結晶精制。這種方法稱為重結晶法。結晶經重結晶后所得各部分母液，再經處理又可分別得到第二批、第三批結晶。這種方法則稱為分步結晶法或分級結晶法。晶態物質在一再結晶過程中，結晶的析出總是越來越快，純度也越來越高。分步結晶法各部分所得結晶，其純度往往有較大的差異，但常可獲得一種以上的結晶成分，在未加檢查前不要貿然混在一起。

　　6．結晶純度的判定：化合物的結晶都有一定的結晶形狀、色澤、熔點和熔距，一可以作為鑒定的初步依據。這是非結晶物質所沒有的物理性質。化合物結晶的形狀和熔點往往因所用溶劑不同而有差異。原托品堿在氯仿中形成棱往狀結晶，熔點207℃；在丙酮中則形成半球狀結晶，熔點203℃；在氯仿和丙酮混合溶劑中則形成以上兩種晶形的結晶。又如N一氧化苦參堿，在無水丙酮中得到的結晶熔點208℃，在稀丙酮（含水）析出的結晶為77～80℃。所以文獻中常在化合物的晶形、熔點之后注明所用溶劑。一般單體純化合物結晶的熔距較窄，有時要求在0．5℃左右，如果熔距較長則表示化合物不純。

　　但有些例外情況，特別是有些化合物的分解點不易看得清楚。也有的化合物熔點一致，熔距較窄，但不是單體。一些立體異構體和結構非常類似的混合物，常有這樣的現象。還有些化合物具有雙熔點的特性，即在某一溫度已經全部融熔，當溫度繼續上升時又固化，再升溫至一定溫度又熔化或分解。如防己諾林堿在1760C時熔化，至200℃時又固化，再在2420C時分解。中草藥成分經過同一溶劑進行三次重結晶，其晶形及熔點一致，同時在薄層層析或紙層層析法經數種不同展開劑系統檢定，也為一個斑點者，一般可以認為是一個單體化合物。但應注意，有的化合物在一般層析條件下，雖然只呈現一個斑點，但并不一定是單體成分。例如鹿含草中主成分為高熊果砍，異高熊果甙極難用一般方法分離，經反復結晶后，在紙層及聚酞胺薄層上都只有一個斑點，易誤認為單一成分，但測其熔點在115～125℃，熔距很長。經制備其甲醚后，再經紙層層析檢定，可以出現兩個斑點，異高熊果甙的比移值大于高熊果甙。又如水菖蒲根莖揮發油中的α一細辛醚和β一細辛醚，在一般薄層上均為一個斑點，前者為結晶，熔點63℃，后者為液體沸點296℃，用硝酸銀薄層或氣相層忻很容易區分。有時個別化合物（如氨基酸）可能部分地與層析紙或薄層上的微量金屬離子（如Cu）、酸或堿形成絡合物、鹽或分解而產生復斑。因此，判定結晶純度時，要依據具體情況加以分析。此外，高壓液譜、氣相層析、紫外光譜等，均有助于檢識結晶樣品的純度。