是催化膽堿酯水解的酯酶。HO（CH₃）₃N （CH₂）₂OCOR H₂O→^－HO（CH₃）₃N^＋（CH₂）₂OH＋RCOOH。 EC 3．11．8。根據底物的特異性和其他特性分為膽堿酯酶Ⅰ和膽堿酯酶Ⅱ。Ⅰ又稱為乙酰膽堿酯酶，發現于紅血球、神經組織、胎盤和生物發電器官中，它專以乙酰膽堿為底物，特異地參于膽堿性能突觸的傳遞。底物特異性高。膽堿酯酶Ⅱ，廣泛地分布于血清、胰臟內。特異性比膽堿酯酶Ⅰ低，稱為非特異性酯酶、擬膽堿酯酶、S（血清）型膽堿酯酶等。膽堿酯酶在生理上的意義是將化學遞質乙酰膽堿進行分解而完成興奮傳導過程，這是由Ⅰ型膽堿酯酶所作用的。毒扁豆堿（eserine）是其特異性抑制劑。