亚欧乱色视频网站大全,国产在线啪,不卡中文字幕在线观看,青青色在线视频,久久国产精品高清一区二区三区,国产a视频精品免费观看

VIP標識 上網(wǎng)做生意,首選VIP會員| 設為首頁| 加入桌面| | 手機版| RSS訂閱
食品伙伴網(wǎng)服務號
 

siRNA表達載體

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01

多數(shù)的siRNA表達載體依賴RNA聚合酶III 啟動子(pol III)中的一種,操縱一段45—50nt的發(fā)夾結(jié)構(gòu)RNA(small hairpin RNA, shRNA)在哺乳動物細胞中的表達,shRNA在細胞內(nèi)會自動被加工成為siRNA,從而引發(fā)基因沉默或者表達抑制。這一類啟動子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6啟動子和人H1啟動子等。采用RNA pol III啟動子的原因是由于它有明確的啟始和終止序列,總是在離啟動子一個固定距離的位置開始轉(zhuǎn)錄合成RNA,遇到4—5個連續(xù)的U即終止,并且轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物在第二個尿嘧啶處被切下來,非常精確,而且還可以在哺乳動物細胞中表達更多的小分子RNA。轉(zhuǎn)錄出的RNA形成發(fā)卡樣結(jié)構(gòu)后,會在3’端形成2個突出的尿嘧啶,這類似于天然的siRNA,因而有利于雙鏈RNA誘發(fā)RNAi。要使用這類載體,需要訂購2段編碼短發(fā)夾RNA序列的DNA單鏈,退火后克隆到相應載體的pol III 啟動子下游。克隆的過程需要幾天的時間,也需要經(jīng)過測序以保證克隆的序列是正確的。

先在體外構(gòu)建能表達雙鏈RNA的載體,再將載體轉(zhuǎn)移到細胞內(nèi)在細胞內(nèi)合成出雙鏈RNA,不但能增加有效轉(zhuǎn)染細胞的種類,而且在長期穩(wěn)定表達載體的細胞株中,雙鏈RNA能夠長期發(fā)揮阻斷基因的作用。

現(xiàn)在有多個報道說通過質(zhì)粒表達siRNAs同樣可以抑制特定基因的表達。當這種帶有PolIII 啟動子和shRNA編碼序列的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染哺乳動物細胞時,這種能表達siRNA的質(zhì)粒確實能夠下調(diào)特定基因的表達,抑制范圍包括外源基因和內(nèi)源基因。

腺病毒是體內(nèi)轉(zhuǎn)基因的常用載體。Xia HaiBin等用腺病毒做載體,在體內(nèi)和體外表達dsRNA,并成功的阻斷了基因的表達,從而實現(xiàn)了成體動物的基因敲除。

最近多個廠家開始研究逆轉(zhuǎn)錄病毒和其他病毒載體用于siRNA表達,其優(yōu)勢在于可以直接高效率感染細胞進行基因沉默的研究,避免由于質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率低而帶來的種種不便。

主要優(yōu)點:

1.是唯一可以進行長期研究的方法。雙鏈RNA只能短暫抑制哺乳動物細胞的基因表達,而具有發(fā)卡結(jié)構(gòu)的雙鏈RNA能夠增加阻斷基因表達的時間。在小鼠畸胎瘤細胞,胚胎干細胞,C2C12細胞中,用長鏈具有發(fā)卡結(jié)構(gòu)的雙鏈RNA有效的阻斷了報告基因的表達,在穩(wěn)定表達具有發(fā)卡結(jié)構(gòu)的雙鏈RNA的細胞株中,報告基因的表達被長期的阻斷了。帶有抗生素標記的載體可以在細胞中持續(xù)抑制靶基因的表達,持續(xù)數(shù)星期甚至更久。即使是對轉(zhuǎn)染帶有篩選標記質(zhì)粒的細胞進行瞬時篩選,也有助于富集帶質(zhì)粒的細胞。這也可以幫助解決一些難轉(zhuǎn)染的細胞由于轉(zhuǎn)染效率低造成的問題。

2.由于質(zhì)粒可以復制擴增,相比起化學合成來說,能夠顯著降低制備siRNA的成本。

適用:已知一個有效的siRNA序列,需要維持較長時間的基因沉默,或者需要用抗生素篩選能表達siRNA的細胞。長期研究。
不適用:篩選siRNA序列(其實主要是指需要多個克隆和測序等較為費時、繁瑣的工作)。

 
[ 網(wǎng)刊訂閱 ]  [ 食品專題搜索 ]  [ ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 關閉窗口 ] [ 返回頂部 ]

 

 
推薦圖文
推薦食品專題
點擊排行
 
 
Processed in 0.290 second(s), 19 queries, Memory 0.88 M
主站蜘蛛池模板: 中文字幕一区二区三区四区| 青青青爽国产在线视频| 国产精品天天影视久久综合网| k频道国产福利永久在线视频| 亚洲国产成人综合| 制服丝袜综合国产精品| 亚洲综合一区二区精品久久| 亚洲国产综合精品| 午夜久久网| 婷婷伊人网| 网色视频| 亚洲黄色在线| 亚洲欧洲国产视频| 亚洲免费视频网站| 亚洲日本激情综合在线观看| 先锋资源亚洲| 亚洲精品美女久久久久| 亚洲成aⅴ人片在线观| 午夜在线观看免费| 天天操天天干天天做| 午夜性色| 亚洲精品手机在线观看| 亚洲国内精品自在线影视| 亚洲国产天堂久久综合226| 亚洲欧美中日韩中文字幕| 亚洲天堂视频在线免费观看| 一二三四高清在线手机视频| 伊人久久综合谁合综合久久| 综合好色| 97视频免费在线| 啊v天堂在线| 国产日本在线视频| 久久免费资源福利资源站| 男男啪到深处gif动态图视频| 欧美性天堂| 视频在线欧美| 亚洲一区在线视频观看| 青青久在线| 中国农民真实bbwbbw| 伊人久久大香线蕉综合网站| 99re热在线视频|