1．原理 用Iodogen為氧化劑，對蛋白質(zhì)和多肽抗原進(jìn)行碘化標(biāo)記，把125I直接引進(jìn)分子中的酪氨酸殘基上。標(biāo)記過程中被標(biāo)記樣品不與Iodogen混合，標(biāo)記后取出樣品即停止反應(yīng)，不使用任何還原劑。
2．方法
（1）標(biāo)記之前，先把Iodogen溶于有機(jī)溶劑，涂于管底，并使之干燥。
（2）標(biāo)記時(shí)，將蛋白質(zhì)溶液10～20μg/10μl(0.5mol/L,pH7.5PB)置于反應(yīng)管中，反應(yīng)管置于冰浴中。碘化時(shí)，125I與蛋白質(zhì)克分子之比例為1～1.2。反應(yīng)時(shí)間在溫和的連續(xù)的攪拌下可達(dá)10min，從反應(yīng)管中轉(zhuǎn)移出反應(yīng)混合液，使其反應(yīng)停止。反應(yīng)液轉(zhuǎn)移到含有200μl0.01mol/L、pH7.2PB和0.15mol/L NaCl溶液中，層析分離前再放置5min，使其未標(biāo)記的碘離子還原成分子碘，以避免在帶有緩沖液的柱中使白蛋白碘化。
3．注意事項(xiàng)
（1）涂有Iodogen的反應(yīng)管，有氮?dú)庵忻芊猓①A存在-20℃條件下，至少可用3個月。打開管，使用時(shí)間很短。
（2）碘化反應(yīng)時(shí)間，7min時(shí)標(biāo)記率達(dá)最高，10min時(shí)略有減少。PH6.0～8.5時(shí)，標(biāo)記率最高。
（3）Iodogen與蛋白質(zhì)的比率是標(biāo)記率的函數(shù)。最大的標(biāo)記率是1克分子的Iodogen與8克分子或再多量之比。
2．方法
（1）標(biāo)記之前，先把Iodogen溶于有機(jī)溶劑，涂于管底，并使之干燥。
（2）標(biāo)記時(shí)，將蛋白質(zhì)溶液10～20μg/10μl(0.5mol/L,pH7.5PB)置于反應(yīng)管中，反應(yīng)管置于冰浴中。碘化時(shí)，125I與蛋白質(zhì)克分子之比例為1～1.2。反應(yīng)時(shí)間在溫和的連續(xù)的攪拌下可達(dá)10min，從反應(yīng)管中轉(zhuǎn)移出反應(yīng)混合液，使其反應(yīng)停止。反應(yīng)液轉(zhuǎn)移到含有200μl0.01mol/L、pH7.2PB和0.15mol/L NaCl溶液中，層析分離前再放置5min，使其未標(biāo)記的碘離子還原成分子碘，以避免在帶有緩沖液的柱中使白蛋白碘化。
3．注意事項(xiàng)
（1）涂有Iodogen的反應(yīng)管，有氮?dú)庵忻芊猓①A存在-20℃條件下，至少可用3個月。打開管，使用時(shí)間很短。
（2）碘化反應(yīng)時(shí)間，7min時(shí)標(biāo)記率達(dá)最高，10min時(shí)略有減少。PH6.0～8.5時(shí)，標(biāo)記率最高。
（3）Iodogen與蛋白質(zhì)的比率是標(biāo)記率的函數(shù)。最大的標(biāo)記率是1克分子的Iodogen與8克分子或再多量之比。
