酶促生物素標記cRNA探針基本方法和放射性標記cRNA探針同,所不同的是探針濃度為2.5μg/μl。顯示探針反應步驟如下。
。1)用PBS沖洗粘附有切片的載片2×3min。根據情況也可用漂洗法。
。2)將載片浸入0.3%H2O2在PBS或甲醇內30min以封閉內源性過氧化物酶。
(3)PBS沖洗2×3min,用吸水紙拭干切片周圍的水份,加入小鼠抗生物素血清1:100和PBS含正常羊血清(1:30),室溫1h,或4℃過夜。
(4)PBS徹底沖洗。
。5)載片加生物素化抗小鼠IgG(1:100)30min室溫。
。6)PBS徹底沖洗。
。7)應用ABC復合物與等量的1%牛血清白蛋白-PBS液混合孵育1h,室溫。
(8)PBS徹底沖洗。
(9)將切片覆以新鮮配制的0.025贐溶液,0.02%H2O2,孵育3~15min。
。10)水洗,復染,脫水,透明和以甘油/PBS或DPX封固。如需要可用銀染,多層ABC或PAP法加強染色效果。
。1)用PBS沖洗粘附有切片的載片2×3min。根據情況也可用漂洗法。
。2)將載片浸入0.3%H2O2在PBS或甲醇內30min以封閉內源性過氧化物酶。
(3)PBS沖洗2×3min,用吸水紙拭干切片周圍的水份,加入小鼠抗生物素血清1:100和PBS含正常羊血清(1:30),室溫1h,或4℃過夜。
(4)PBS徹底沖洗。
。5)載片加生物素化抗小鼠IgG(1:100)30min室溫。
。6)PBS徹底沖洗。
。7)應用ABC復合物與等量的1%牛血清白蛋白-PBS液混合孵育1h,室溫。
(8)PBS徹底沖洗。
(9)將切片覆以新鮮配制的0.025贐溶液,0.02%H2O2,孵育3~15min。
。10)水洗,復染,脫水,透明和以甘油/PBS或DPX封固。如需要可用銀染,多層ABC或PAP法加強染色效果。