指在160－170℃溫度下，利用熱輻射和滅菌器內熱空氣的對流以殺滅微生物及其芽抱的方法。干熱滅菌法在滅菌溫度下應保持2小時以上。決定此過程的時間，一般應包括：滅菌物品達到烘箱內滅菌溫度的合理遲滯時間，完成滅菌的適宜的保溫時間，以及滅菌物品恢復于室溫的冷卻時間。不同的溫度滅菌過程所需的時間也不同：140℃必須在3小時以上，160－170℃在2小時以上。260℃為45分鐘。由于滅菌過程時間長，因此有些物品不宜采用此法，如纖維織品160℃以上開始變焦，許多化學藥品也不能用干熱滅菌法，只有少數藥物的粉針劑（如苯巴比妥鋼）可在150℃干熱滅菌1小時，磺膠等遇高熱熔化或易分解的藥物，一般采用140℃3小時滅菌。