最常用的檢驗乙型肝炎病原體的試驗。以前又稱澳大利亞抗原或肝炎協同抗原。乙型肝炎病毒是DNA病毒。在乙肝病人血清中可發現3種形態不同的病毒顆粒。即大球形顆粒（Dane顆粒）、小球形及管狀顆粒。前者為完整的乙肝病毒顆粒，含有病毒的表面抗原（HBsAg）、核心抗原、e抗原及DNA 多聚酶等；后兩者的主要成分為HBsAg。HBsAg是一種含糖的脂蛋白，由6種多肽組成。有共同的抗原決定簇“a”和幾種亞型抗原決定簇d、y、w、r，按不同組合構成多種亞型。我國以adr型為多見。HBsAg有免疫原性，能刺激機體產生抗體，起抵抗乙肝病毒的作用。HBsAg是乙型肝炎的一個重要診斷指標，多數急性乙型肝炎病人在疾病的潛伏期即可檢出HBsAg，在急性期達高峰，以后迅速下降。慢性活動性肝炎、慢性遷延性肝炎、肝炎后肝硬化、原發性肝癌等，也可檢出HBsAg。HBsAg攜帶者的血清中HBsAg陽性結果持續時間可能很長，但并不表現出疾病。HBsAg的檢查方法很多，有瓊脂免疫擴散法、對流電泳法、反向被動血凝法（RPHA）、酶聯免疫法、固相放射免疫法等。但前二者靈敏度不夠，已很少用。RPHA法操作簡單快速，不需特殊儀器，靈敏度高于前二者，為目前應用較多之方法，但其靈敏度與特異性仍不如酶聯免疫法，故將會被酶聯免疫法所取代。放射免疫法雖然靈敏、特異，但須同位素標記，試劑來源不足，不宜推廣。肝炎病毒對干燥與紫外線耐力強。可用高壓滅菌法或過氧乙酸浸泡等方法消毒。