即將供血者的紅細胞與受血者的血清（主側）及受血者的紅細胞與供血者的血清（次側），分別做配血試驗，觀察有無凝集反應。前者稱為交叉配血的主側，后者為次側，因為最常見的嚴重溶血反應，多因受血者血清中的血型抗體（凝集素）作用于輸入紅細胞膜上的血型抗原而引起，并非因輸入血清中的血型抗體作用于受血者的紅細胞所致。由于輸入的血型抗體可被受血者的血漿稀釋，并可被固定組織抗原中和而失效。故臨床上配血，主要檢查供血者紅細胞膜上的血型抗原與受血者血清中的血型抗體是否發生凝集反應。交叉配血的兩側均無凝集反應，為配血相合，可以輸血。主側出現凝集反應，為配血不合，不能輸血，主側無凝集反應，次側出現凝集反應，為配血基本相合，在緊急情況下才可輸血，但要特別慎重，不可輸得太快、太多，并密切觀察有無輸血反應。輸血時不僅要鑒定ABO血型和Rh血型，即使輸入同型血，或受血者再次接受同一供血者的血液，都必須做交叉配血試驗。因人類的血型很復雜，目前已發現有15個血型系統，即使是同型血，還有亞型的差別，如受血者需大量輸血時，尚需做獻血者之間的交叉配血試驗。