一、用途

彎曲桿菌乳膠凝集快速檢測試劑用于快速確證鑒定細菌性腸炎病人的糞便樣品在選擇性平板上分離出的可疑腸道致病性的嗜溫性彎曲桿菌菌落。該試劑盒僅供專業人員使用。

二、原理

乳膠顆粒表面包被有與空腸彎曲桿菌血清型抗原具有特異性的兔免疫球蛋白，當敏化的乳膠顆粒遇到彎曲桿菌致病菌的抗原時，可發生特異性、高靈敏度的免疫化學反應，使分散的乳膠微粒迅速形成肉眼可見的凝集。

三、試劑盒組成成分

REAG TEST  測試試劑　M46a 彎曲桿菌乳膠測試試劑　2.5mL

乳膠顆粒包被與彎曲桿菌抗原具有特異性的兔抗體。含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（藍色瓶蓋）

REAG CONTROL  對照試劑　M46b　陰性對照乳膠試劑　　　　2.5mL

乳膠顆粒包被有非特異性的兔免疫球蛋白，含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（白色瓶蓋）

CONTROL +  陽性對照試劑　M46c 陽性對照試劑　　　　1.0mL

不具活性的彎曲桿菌抗原，與測試乳膠試劑反應，但不與對照乳膠試劑反應。含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（黑色瓶蓋）

SAMP DIL  樣品稀釋液　　M46d 樣品稀釋液　　50mL

甘氨酸緩沖鹽水，含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。

使用說明書

檢測板

攪拌棒

需要的其它材料

l       接種環

l       彎曲桿菌選擇性平板

l       塑料樣品試管（容積1mL）

l       維持微需氧環境的氣罐

l       42℃培養箱（如果沒有，可以使用37℃培養箱）

四、警告和注意事項

安全：

1、試劑僅供體外診斷使用

2、試劑盒作防腐劑使用的疊氮化鈉可與鉛或銅制品反應形成易爆的金屬疊氮化物。可用大量水沖洗以避免疊氮化物的堆積。

3、在處理或檢測可疑致病菌時應采取適當的預防措施。被污染的物品可用3%的次氯酸鈉消毒處理30分鐘。含酸的廢液應作中和處理。

4、陽性對照液在生產中已作惰性處理。但在使用中，依然應遵循潛在傳染性產品的處理程序。

檢測過程：

1、試劑盒應按說明書使用。

2、所有試劑在使用前應達到室溫。

3、不要稀釋試劑盒內的任何試劑。

4、不要混合不同批次試劑盒的試劑。

5、不要冷凍試劑盒內的試劑。

6、不要使檢測乳膠試劑的滴管接觸到陽性對照試劑或細菌樣品。

7、使用前應確保檢測板清潔干燥。

五、貯存及保質期

檢測試劑盒不使用時應貯存在2～8℃，并應在包裝盒標簽上的有效期內使用檢測試劑。

六、樣本

糞便樣品應先在無血的選擇性培養基上培養（改良CCDA Preston培養基）(見附錄)，每個平板接種0.2～0.3克的樣品，平板應在微氧環境中42℃培養48小時。

用乳膠凝集試劑檢測選擇性分離平板上的可疑彎曲桿菌菌落。

七、檢測過程

質量控制：

在每次使用檢測試劑盒前應用陽性對照作下列質量控制檢測，以確保試劑有效。

1、分別滴1滴50μL陽性對照于檢測板的2個相鄰反應環內。

2、然后分別用測試液和對照液按以下“測試程序”進行檢測。

3、如果出現下列情況，試劑可能出現變質：

l       陽性對照與測試試劑無反應或反應的強度隨時間減弱。

l       陰性對照試劑與陽性對照發生反應。

l       測試試劑變成無色或結塊并無法搖成均勻懸浮液。

測試程序：

1、待所有試劑達到室溫時，將測試乳膠試劑輕輕地搖成均勻的懸浮液。

2、分別滴加50μL的稀釋樣品液于檢測板的2個反應環內

3、分別用接種環挑取幾個可疑的彎曲桿菌菌落與反應環內的稀釋樣品液混合，形成均勻的菌懸液。如果平板上的菌落較稀小，應在平板表面挑取更多的菌落。

4、于1個反應環內的菌懸液中滴1滴（50μL）陰性對照試劑，同樣的于另1個反應環內的菌懸液中滴1滴（50μL）乳膠測試試劑。

5、用1支攪拌棒在整個反應環內混勻陰性對照試劑和菌懸液，然后再混勻測試試劑和菌懸液。

6、輕搖檢測板，使混勻液在反應環內輕輕流動2分鐘，觀察凝集結果。

7、按下表判斷結果。

8、記錄結果后，將攪拌棒和檢測板進行適當的消毒處理。

八、結果說明

凝集反應出現肉眼可見的乳膠顆粒聚集，其反應強度會有所不同，可依據下列原則判斷：

＋ 凝集顆粒較細，但易于辨別，背景為乳狀。

＋＋顆粒較粗，背景為乳狀。

＋＋＋顯著的凝集聚集于橢圓形反應環的內邊緣，背景清晰。

彎曲桿菌乳膠凝集試劑盒的結果，說明如下：

如果樣品引起質量控制試劑凝集，即不可用乳膠試劑盒檢測。

九、使用的局限性

1、結果應依據所有的臨床和實驗室信息進行判斷。

2、非特異性凝集不排除存在彎曲桿菌的可能性，只是結果不確定。樣品應采用其它方法檢測。

3、彎曲桿菌數量過低時，可導致陰性結果。應檢測48小時的培養物，以使其數量達到最大值。

十、檢測效果對比

分別在兩個獨立的檢測中心和公司內部對Microscreen彎曲桿菌乳膠試劑盒確證檢測效果進行評價。527份糞便樣品經選擇性平板上接種培養48小時，用Microscreen彎曲桿菌乳膠試劑盒測試其菌落。

靈敏度：143/145=98.6%

特異性：381/382=99.7%

有效性：524/527=99.4%

通過測試以下大量不同的菌株的培養物來驗證Microscreen彎曲桿菌乳膠試劑盒的特異性：

所有測試的嗜溫彎曲桿菌均與Microscreen彎曲桿菌乳膠試劑反應。測試的11株非嗜溫性的彎曲桿菌中，3株呈現出微弱的非特異性凝集，其余的均不與乳膠試劑反應。

在相近的有關聯的細菌組中，2株Helicobacter pylori(共有12株)在測試中呈現微弱反應，2株Helicobater cinaedi 出現交叉反應。

測試了大范圍的其它無關聯的細菌，除了1株鮑氏不動桿菌呈現出較強的非特異性凝集外，其余均不與乳膠試劑反應。

十一、重復性

批內重復性：通過以系列稀釋度的參照抗原和試劑盒對照抗原對同1批產品的靈敏度進行檢測。由不同的操作者隨機測試3次，最終效價由參照/對照抗原測定，并且3次定性分析結果完全一致。

批間的重復性：通過以系列稀釋度的參照抗原和試劑盒對照抗原對3批產品的靈敏度進行檢測。3個批次間，最終效價無顯著差異。

附錄

準備無血選擇性培養基—改良CCDA  Preston.

1、  稱取22.75g彎曲桿菌無血選擇性基礎培養基(Campylobacter Blood-Free Selective Agar Base (Oxoid CM739))，溶于500mL蒸餾水中，煮沸溶解。

2、121℃高壓蒸汽滅菌15分鐘。

3、培養基冷卻至50℃，無菌條件添加1支氨哌羥苯唑頭孢菌素選擇性添加劑(Cefoperazone Selective Supplement (Oxoid SR125))。