一、引言

被污染的食品，包括奶制品和非奶制品，是李斯特氏菌散發(fā)或爆發(fā)的主要起源。李斯特氏為食源性致病菌，在自然界中廣泛存在，并且為多種動物的腸道攜帶菌。因此對李斯特氏菌進(jìn)行快速檢測是非常重要的。

二、用途

李斯特氏菌乳膠凝集檢測試劑用于初步鑒定選擇性平板上分離出的可疑菌落，可結(jié)合生化分析對李斯特氏菌進(jìn)行全面鑒定。

三、原理

乳膠顆粒表面包被與單增李斯特氏菌和格氏李斯特氏菌純化鞭毛蛋白具有特異性的多價抗血清。與李斯特氏菌菌懸液混合后，乳膠顆粒可迅速凝集。達(dá)到檢測靈敏度時，Microgen™李斯特氏菌乳膠凝集試劑盒可檢測李斯特氏菌屬的所有有動力菌株。

四、試劑盒組成成分

REAG TEST HM48a 李斯特氏菌乳膠測試試劑　2.5mL

乳膠顆粒包被與李斯特氏菌鞭毛抗原具有特異性的兔抗血清。含0.02%的硫柳汞防腐劑。

Positive Control HM48b　陽性對照　　0.5mL

含0.02%的硫柳汞防腐劑。

NaCl 0.85% 0.85%鹽水　HM40　0.85%生理鹽水　5.0mL

含0.1%的疊氮化鈉防腐劑。

使用說明書

檢測板

攪拌棒

需要的其它材料

l       接種環(huán)

五、貯存及保質(zhì)期

檢測試劑盒不使用時應(yīng)貯存在2～8℃，不要冷凍試劑盒。在包裝盒標(biāo)簽上的有效期內(nèi)使用檢測試劑。

六、警告和注意事項

安全：

1、試劑盒內(nèi)的生理鹽水含有0.099%的疊氮化鈉作為防腐劑，疊氮化鈉可與鉛或銅制品反應(yīng)形成易爆的金屬疊氮化物。可用大量水沖洗以避免疊氮化物的堆積。

2、陽性對照液在生產(chǎn)中已作惰性處理。但在使用中，依然應(yīng)遵循潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序。

3、在處理或檢測可疑致病菌時應(yīng)采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施。

檢測過程：

1、試劑盒應(yīng)按說明書使用。

2、不要稀釋試劑盒內(nèi)的任何試劑。

3、不要混合不同批次試劑盒的試劑。

4、不要使用過期產(chǎn)品。

5、不要冷凍試劑盒內(nèi)的試劑。

6、注意檢測過程中的質(zhì)量控制部分。

7、注意凝集狀態(tài)，呈凝乳狀或纖維狀可能為非真實(shí)凝集。

七、使用方法

所有試劑在使用前應(yīng)達(dá)到室溫。

從選擇性平板中挑取可疑菌落可以用HKM^®李斯特菌乳膠凝集測試試劑，也可以直接使用HKM^®李斯特菌生化鑒定試劑條。（產(chǎn)品號MID－67）

1、使用含有七葉苷的選擇性平板有利于區(qū)分七葉苷陽性的李斯特菌與七葉苷陰性的非李斯特菌。

2、菌落在測試前，應(yīng)做氧化酶試驗，氧化酶陽性菌株可引起錯誤的反應(yīng)。李斯特菌屬為氧化酶陰性菌。

3、只可測試光滑菌株，粗糙菌株在生理鹽水中會自動凝集。

4、在30℃或以下溫度培養(yǎng)時，鞭毛最多。

質(zhì)量控制：

在每次使用檢測試劑盒前應(yīng)作下列質(zhì)量控制檢測，以確證試劑的有效性。

1、檢測試劑的控制：滴1滴生理鹽水(HM40)于一個測試反應(yīng)環(huán)內(nèi)，并在同一反應(yīng)環(huán)內(nèi)滴1滴測試試劑(F48a)混勻液體，輕搖檢測板1分鐘并觀察是否會出現(xiàn)凝集。應(yīng)無凝集發(fā)生。如果出現(xiàn)凝集反應(yīng)，表明檢測試劑或生理鹽水受到污染，應(yīng)廢棄處理。

2、陽性控制：滴1滴陽性對照試劑(HM48a) 于一個測試反應(yīng)環(huán)內(nèi)，并在同一反應(yīng)環(huán)內(nèi)滴1滴測試試劑(HM48a)，不要使檢測乳膠試劑的滴管接觸到陽性控制試劑。用攪拌棒在整個區(qū)域內(nèi)混勻液體，輕搖檢測板2分鐘并觀察結(jié)果。出現(xiàn)易于判斷的凝集反應(yīng)，表明試劑正常有效。

測試程序：

從選擇性平板中挑取可疑菌落進(jìn)行測試

1、取1張檢測板放在工作臺上。

2、滴1滴生理鹽水(HM40)于檢測板的一個反應(yīng)環(huán)內(nèi)。

3、用接種環(huán)或攪拌棒從選擇性分離平板上挑取可疑菌落，與反應(yīng)環(huán)內(nèi)的生理鹽水混合，形成均勻混濁的菌懸液。

4、觀察是否會出現(xiàn)自動凝集現(xiàn)象。如果菌懸液保持均勻狀態(tài)，繼續(xù)第5步。

5、搖勻乳膠測試試劑后，滴加1滴于菌懸液中，不要使檢測乳膠試劑的滴管接觸到菌懸液。用1支干凈的攪拌棒混勻菌懸液和測試試劑，輕搖檢測板。混勻后，廢棄的攪拌棒應(yīng)作適當(dāng)?shù)南�毒處理�?/span>

6、在2分鐘內(nèi)觀察凝集結(jié)果。

7、記錄結(jié)果后，將檢測板進(jìn)行適當(dāng)?shù)南�毒處理�?/span>

八、結(jié)果說明

在2分鐘內(nèi)出現(xiàn)凝集，表明樣品中有李斯特氏菌，如不出現(xiàn)凝集，表明測試菌落中無李斯特氏菌或存在數(shù)量低于可測量的水平。

九、使用的局限性

1、李斯特氏菌的粗糙菌株可在生理鹽形成非特異性自動凝集，因此不可用于乳膠試劑盒檢測。

2、在30℃以上培養(yǎng)的菌株可能不產(chǎn)生鞭毛，因此可導(dǎo)致假陰性結(jié)果。

3、不能檢測無動力的李斯特氏菌。

4、部分葡萄球菌和革蘭氏陽性桿菌可引起假陽性結(jié)果。

5、乳膠凝集檢測為初步鑒定結(jié)果，所有的陽性結(jié)果的純培養(yǎng)物應(yīng)作進(jìn)一步的生化分析。（如使用產(chǎn)品編號為MID－67的MID李斯特氏菌鑒定試劑條）

十、檢測效果測試

用HKM^®李斯特氏菌乳膠凝集檢測已知的105株李斯特氏菌的菌落，檢測結(jié)果確證為這些菌株。

 
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