反相色譜（ RPC）是高效液相色譜HPLC最受歡迎的一個(gè)應(yīng)用，尤其對(duì)蛋白的表征非常有用。因?yàn)闃悠返南疵撆c其增水性有很大關(guān)系，一般不可能在洗脫時(shí)間（體積）的基礎(chǔ)上識(shí)別被分離的樣品。通常，每一洗脫片段都必須用其它技術(shù)進(jìn)行進(jìn)一步的分離和分析，才能得到蛋白質(zhì)分子的分子行為表征。

　　在 HPLC系統(tǒng)的基礎(chǔ)上，加上一臺(tái)miniDAWN或DAWN檢測(cè)器，會(huì)大大簡(jiǎn)化蛋白的表征，可以直接測(cè)絕對(duì)分子量并可觀察溶液中的蛋白特性。

　　圖 1是輕度氧化的基本纖維原細(xì)胞增長(zhǎng)因子（bFGF）（由0.2當(dāng)量的DTNB制成）的色譜圖。前兩個(gè)峰的光散射信號(hào)大約是UV信號(hào)的兩倍，而第三個(gè)峰兩者的信號(hào)強(qiáng)度相等。從圖上很清楚地看出，從左到右三個(gè)峰，其中兩個(gè)是兩種二聚體，一個(gè)是單體bFGF，它們的分子量分別是33K，34K，17K道爾頓。

　　圖 2是四個(gè)不同組分的分子量對(duì)洗脫體積圖，每一組分都有不同程度的氧化。很明顯，存在著二聚體、三聚體、四聚體，但出現(xiàn)的順序和洗脫體積的順序不一致。

　　采用的系統(tǒng)是 HPLC，包括HP 1050四元泵、脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器，UV二極管陣列檢測(cè)器和一臺(tái)miniDAWN。一根Vydac C4蛋白柱。（150mm×4.6mm,300埃），流速0.7ml/min.

　　miniDAWN可對(duì)每個(gè)洗脫峰進(jìn)行絕對(duì)表征，另外，還可測(cè)得每一洗脫片段的均方根旋轉(zhuǎn)半徑。例如：對(duì)bFGF五聚體，其旋轉(zhuǎn)半徑大約為13納米，表明分子量85K道爾頓的多聚體是棒狀結(jié)構(gòu)的構(gòu)型。

 

　　只要在反相色譜 RPC上加一臺(tái)miniDAWN就可對(duì)每一洗脫片段測(cè)量絕對(duì)分子量、多聚體的形狀、分子尺寸 、分子構(gòu)型。