液相色譜儀色譜柱使用及維護(hù) 每天用足夠的時(shí)間來(lái)平衡色譜柱，您就會(huì)在處理問(wèn)題方面獲得最大的"補(bǔ)償"，而且您的色譜柱的壽命也會(huì)變得更長(zhǎng)！------ 一定得做！ 新的色譜柱在使用之前應(yīng)該在您自己的液相色譜儀上進(jìn)行性能測(cè)試，即使用色譜柱附帶的檢驗(yàn)報(bào)告上測(cè)試條件和樣品來(lái)測(cè)定該色譜柱的柱效。并且，在以后的使用中，應(yīng)時(shí)常對(duì)色譜柱進(jìn)行測(cè)試。 卡套柱的安裝（不加預(yù)柱） 1．將卡套架套入柱芯 2．將兩片夾套片嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夾套（見(jiàn)左圖） 3．將已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高過(guò)夾套片 4．將卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手?jǐn)Q緊 5．然后依同樣的順序連接好柱子的另一端 6．連接到液相色譜儀，PEEK接頭手?jǐn)Q即可；若為不銹鋼接頭應(yīng)使用專(zhuān)用扳手 注意：使用卡套柱時(shí)，兩端的卡套應(yīng)時(shí)刻連接在柱芯上。不管您是平衡色譜柱或是清洗，任何時(shí)候都不能將卡套取下來(lái)，否則會(huì)造成填料的流失。 卡套柱的安裝（加預(yù)柱） 1．將卡套架套入柱芯 2．將兩片夾套片嵌入柱芯的凹槽，使夾套高于柱芯（見(jiàn)左圖） 3．將已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高過(guò)夾套片 4．將"子彈頭"預(yù)柱放入卡套片內(nèi) 5．將卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手?jǐn)Q緊 6．然后依同樣的順序連接好柱子的另一端 7．連接到液相色譜儀，PEEK接頭手?jǐn)Q即可；若為不銹鋼接頭應(yīng)使用專(zhuān)用扳手 更換色譜柱濾網(wǎng)和玻璃棉過(guò)濾片（同時(shí)可以修補(bǔ)色譜柱） 注意：在取出反相柱芯的濾網(wǎng)和玻璃片之前，應(yīng)該將色譜柱充分用水和甲醇/乙腈沖洗，而且修補(bǔ)工具的頭部也應(yīng)該蘸取少量的甲醇/乙腈，以避免在取出濾網(wǎng)和玻璃棉濾片時(shí)帶出柱子內(nèi)的填料。 1．將修補(bǔ)工具中的2套入柱芯的頂端 2．將修補(bǔ)工具中的3輕輕地旋入已套著2的柱芯中，并順時(shí)針?lè)较蛐�轉(zhuǎn)到旋緊 3．一手握柱芯，另一只手輕輕地向外拉3，取出柱芯頂端的濾網(wǎng) 4．用一個(gè)小鏟子輕輕地取出濾網(wǎng)下面的玻璃棉以及被污染的填料 5．將新的填料用甲醇潤(rùn)濕，然后填入挖去的部位，壓平 6．照（左圖）裝上新的玻璃棉濾網(wǎng)，并用修補(bǔ)工具中的4將玻璃棉壓入柱芯頂端 7．柱芯頂端套上2，然后參照（左圖）將濾網(wǎng)放入 8．壓緊，然后取下2，再用4將濾網(wǎng)的邊緣壓平 平衡色譜柱 　反相色譜柱在經(jīng)過(guò)出廠測(cè)試后是保存在乙腈/水中的。請(qǐng)一定確保您所使用的流動(dòng)相和乙腈/水互溶。由于色譜柱在儲(chǔ)存或運(yùn)輸過(guò)程中可能會(huì)干掉，因此在用流動(dòng)相分析樣品之前，應(yīng)使用10－20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱；如果您所使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水"過(guò)渡"。 硅膠柱或極性色譜柱在經(jīng)過(guò)出廠測(cè)試后是保存在正庚烷中的。如果該色譜柱需要使用含水的流動(dòng)相，請(qǐng)?jiān)谑褂昧鲃?dòng)相之前用乙醇或異丙醇平衡 如何平衡色譜柱？ 平衡過(guò)程中，將流速緩慢地提高 用流動(dòng)相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線（緩沖鹽或離子對(duì)試劑度如果較低，則需要較長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)平衡） 色譜柱的再生 　　進(jìn)行色譜柱再生時(shí)，應(yīng)使用一個(gè)謙價(jià)的泵，我們建議最好不使用您的高效液相色譜儀上的泵。 表1　建議用來(lái)沖洗的溶劑體積 色譜柱尺寸 柱體積 所用溶劑的體積 125-4 1.6ml 30ml 250-4 3.2ml 60ml 250-10 -20ml 400ml 請(qǐng)根據(jù)下表選擇您的再生方法： 極性固定相（如Si，NH2，DIOL基色譜填料）的再生： 正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水 非極性固定相（如反相色譜填料RP－18，RP－8，CN等）的再生： 水→乙腈→氯仿（或異丙醇）→乙腈→水 0.05M稀硫酸可以用來(lái)清洗已污染的色譜柱 注意： 在對(duì)NH2改性的色譜柱進(jìn)行再生時(shí)，由于NH2可能成銨根離子的形式存在，因此應(yīng)該在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液完全流出。 如果簡(jiǎn)單的有機(jī)溶劑/水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì)，用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。 色譜柱的維護(hù) 1．使用預(yù)柱保護(hù)分析柱（硅膠在極性流動(dòng)相/離子性流動(dòng)相中有一定的溶解度） 2．大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2－7.5，盡量不超過(guò)該色譜柱的pH范圍 3．避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化 4．流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過(guò)濾處理 5．如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢柱子沖洗干凈，并保存大乙腈中 6．壓力升高是需要更換預(yù)柱的信號(hào)