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3M高靈敏度大腸菌群測試片操作以及判讀 |
| 一、高靈敏度大腸菌群測試片 操作方法 | |
 1. 未開封時，冷藏于≤8℃（≤46℉），并在保存期內用完，高溫度時，凝固水可以排除，包裝物最好于室溫啟開。 |
 2. 已開封的，將封口以膠帶封緊。 |
 3. 已啟開的包裝袋不要冷藏并于一個月內使用完。 |
 4. 制備食物樣品稀釋液，稱取或吸取食物樣品，置入適宜的無菌容器內，如均質袋、稀釋瓶、WhirlPak bag或者其他滅菌容器內 |
 5. 加入適量的無菌稀釋液,包括Buffered peptone Buffer(IDF phopsphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4調PH7.2) 、0.1%的旦白膠水(ISO方法6887) 、緩沖旦白膠水(ISO方法6579) 、鹽溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸餾水.但不可用含有枸櫞酸鹽、bisulfite or thiosulfate的緩沖液. 因為它能抑止菌生長。 |
樣品的稀釋液調PH6.6-7.2對酸性樣用IN NaOH、堿性樣用INHCI調PH。 |
 7、將測試片置于平坦表面處，揭開上層膜。 |
 8、使用吸管將1ml樣液垂直滴加在測試片的中央處。 |
 9、細心將上層膜緩慢蓋下，避免有氣光泡產生，切勿使上層膜直接落下。 |
 10、使用壓板（平面底朝下）放置在上層膜中央處。 |
 11、輕輕的壓下，使樣液均勻覆蓋于圓形的培養面積上，切勿扭轉壓板。 |
 12、拿起壓板，靜置至少1分鐘以使培養基凝固。 |
 14、可目視及用標準菌落計數器或其它的照明放大鏡計數，并可參考判讀卡計算菌落數。 |
 15、可以分離菌落作進一步鑒定，即掀起上層膜，由培養膠上挑取單個菌落。 |
 13、測試片的透明面朝上，可堆疊至20片。培養時間和溫度因方法而有不同，最通用的認可方法是：總大腸菌群 ● AOAC官方方法986.33和989.10（乳/生乳和其它乳制品） 大腸菌群：32℃±1℃培養24±2h ● AOAC官方方法991.14（食品類） 大腸菌群：35℃±1℃培養24±2h ● NMKL方法（147.1993） 大腸菌群：37℃±1℃培養24±2h ● AFNOR認可方法3M 01/2-09/89A和B（除水生貝殼類動物外的所有食品） 大腸菌群：30℃±1℃培養24±2h 耐熱的（糞）大腸菌群 ● AFNOR認可方法，3M 01/2-09/89C（所有食品） 44℃±1℃培養24±2h。當提高培養溫度時，培養箱應有一定的濕度是需要的。 |
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| 二、高靈敏度大腸菌群計數測試片 判讀方法 | |
 Coliform count = 4? |
 Coliform count = 13 |
| 在PetrifilmTM 高靈敏度檢驗測試片上菌落計數相當容易。測試片中的指示劑使革蘭氏陰性菌染成紅色，上層膜能截留大腸菌群產生的氣泡，當大腸菌群大量產酸時，菌落周圍會產生粉紅色的菌暈。所以，計數紅色帶有氣泡的菌落為大腸菌群，菌落周圍的粉紅色菌暈使計數更加方便。 | |
 Coliform count = 30圓圈1, 2和3中的氣泡形狀有所不同。圓圈1中的氣泡和菌落相鄰；圓圈2中的氣泡撐破了菌落，使菌落看似氣泡的“輪廓”；圓圈3中的菌落被3個小氣泡圍住。細菌學手冊上規定，紅色不帶有氣泡的菌落不計作大腸菌群。 |
 Coliform count = 0注意圖4至圖9中培養基顏色的變化。隨著大腸菌群數和產酸的增加，培養基的顏色由淡桔黃色(圖4)逐漸向明顯的粉紅色(圖9)轉變。同時做陰性對照有助于區分培養基的顏色。 |
 Coliform count = 90 |
 Estimated coliform count = 320圓形的生長面積約為60 cm2。當菌落數大于150個時，可選擇1個或多個代表性方格來估算菌落數。計算每個方格的平均菌落數后乘以60，即為估算的大腸菌群數。 |
 Estimated coliform count = 840在接種區邊緣的菌落和氣泡可能較小，且邊緣培養基外觀略有差異，但不會影響菌落的計數。見圖7。 |
 Coliform count = TNTC在PetrifilmTM高靈敏度檢驗測試片上，當菌落數過多時難以計數，該現象稱為TNTC (Too Numerous To Count) 現象。該現象伴有以下特征：許多小型菌落和氣泡，有時培養基顏色會加深。見圖8。 |
 Coliform count = TNTC圖9中，測試片上有許多小型菌落，培養基顏色變深，為TNTC現象。 |
 Coliform count = 2食品顆粒通常呈不規則形狀，且不帶有氣泡。見圓圈1。在測試片上，人為的氣泡可能由于接種不當引起，其形狀不規則，且不帶有紅色菌落。見圓圈2 。 |
6、攪拌或均質樣品. 
