要培養(yǎng)微生物,首先就需要接種,而接種必須在無菌條件下進行。這就需要建造無菌室或接種箱,為接種創(chuàng)造必要的條件。
無菌室可以建在實驗室內(nèi),作為實驗室的一個小套間。面積為4~5平方米,高2.5米左右。無菌室外應(yīng)連接一個小緩沖間,面積為2平方米左右。緩沖間和無菌室的門不要建在同一條直線上,以減少空氣中雜菌進入無菌室。
無菌室和緩沖間應(yīng)作到清潔、密閉性好,室內(nèi)最好有換氣設(shè)備,以便在工作結(jié)束后更換室內(nèi)空氣。兩個房間中應(yīng)各安裝l盞30瓦紫外線燈管和照明用的日光燈,無菌室的紫外線燈應(yīng)懸吊在工作臺的正上方,距臺面1米,以發(fā)揮最大的消毒功能。無菌室內(nèi)的工作臺等用具用品,應(yīng)經(jīng)常保持清潔,避免雜菌污染。
如果û有條件建造無菌室,可以用接種箱代替。接種箱結(jié)構(gòu)簡單,容易制作,其正面安裝玻璃,便于觀察。箱前方開兩個圓洞各接連1只套袖,操作時將兩臂從套袖伸入箱內(nèi)進行操作。箱內(nèi)也應(yīng)懸吊一盞紫外線殺菌燈和一盞日光燈。
二、移液器
用來移取一定量的液體進行接種,主要由按鈕、活塞、彈簧和可以裝卸的吸頭組成。規(guī)格有10uL、20uL、100uL、1000uL、5mL、10mL等,可用定量吸取液體,吸頭為一次性用品,使用方便。
移液器有固定量程移液器和可調(diào)量程移液器。固定量程移液器可移取的體積是固定的,通常功能簡單,價格比較便宜。可調(diào)量程移液器可在容量范Χ內(nèi)移取任意體積的液體,通常較復(fù)雜,價格比較高。實驗人員可以根據(jù)日常工作的需要選用集中不同規(guī)格的合適的移液器。另外,還有可高壓滅菌的移液器和多通道移液器等特殊用途的移液器可供選擇。
移液器需要定期送至儀器檢測部門進行校準,并在移液器顯著λ置貼上校準合格標簽及校準有效期限。除了送檢校準外,平時實驗室也應(yīng)定期對移液器進行自校。自校方法如下:取適量無菌無雜質(zhì)的優(yōu)質(zhì)蒸餾水至于4℃恒溫冰箱內(nèi)24h。打開精密電子天平(精度為0.01g以上),放置一無菌無雜質(zhì)的小燒杯,重新歸零。待精密電子天平的0值穩(wěn)定后,將移液器調(diào)至一數(shù)值(如:1mL、5mL等)吸取4℃的蒸餾水加入小燒杯內(nèi)(純水在4℃時密度最大,此時1mL純水質(zhì)量為1g)。觀察電子天平顯示的質(zhì)量數(shù)值是否與加入的純水體積一致(如:吸1mL純水質(zhì)量是否顯示1.00g,依次類推)。
三、接種針
用來穿刺接種或挑去單個菌落進行平板劃線,最早用白金絲制作,先多用鎳鉻合金絲制成,接種針是一段長8cm,筆直的細絲,固定在長約20cm的金屬柄上。
四、接種環(huán)
用來進行液體和劃線接種,接種針的一段緊緊纏繞在直徑約2mm的圓棒(如:槍頭尖、牙簽等)上,是頂部成為一個圓環(huán),從 根部剪斷稍短的一段鎳鉻絲、使圓環(huán)環(huán)閉無交叉,調(diào)整圓環(huán),使圓環(huán)的圓心和根部鎳鉻絲在同一直線上,在圓環(huán)根部大約5mm處折成160°~170°的夾角,制好的鎳鉻絲環(huán)插至接種棒上。
五、接種圈
用來移植砂土管中的菌種,在接種針的頂端卷起幾圈呈盤狀的環(huán)。
六、接種鉤
用來接種ù菌和放線菌或蘸取微小菌落的培養(yǎng)物,將接種針的頂端彎成一遍長約3mm的直角。
七、涂布器
用來進行菌落計數(shù)或菌種分離。在火焰上將長20cm、直徑3mm~4mm的玻璃棒的一段彎成3cm的等邊三角形,再使三角形平面與柄成140°角,便于操作。
八、移液管
用來稀釋菌懸液及液體接種。上端過濾棉花,有0.1mL、0.2mL、0.5mL、1mL、5mL、10mL等規(guī)格。
九、滴管
用來進行液體接種的。一般為一次性的塑料滴管。
十、其它
不便使用酒精燈的地方可以使用一次性塑料接種針(環(huán))。一次性接種針(環(huán))采用高分子材料聚丙烯(PP)制成,柔軟而富有彈性,表面經(jīng)過特殊處理后具有親水性。接種環(huán)的規(guī)格按直徑一般分1.0uL和10.0uL。