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當液相色譜儀被污染之后，就會出現數據錯誤等問題。今天，我們就和大家一起探討一下，如何判斷液相色譜儀是否被污染以及系統 (HPLC) 中“攜帶污染”（或俗稱“殘留”）發生的原因和減少的方法。
基線變化基線變化一般不會很有規律，如果在自動量程下監控基線情況，不可能得到原來儀器理想狀態的有規律的基線在高頻率上下浮動的變化，而是有時候會得到低頻率變化的峰，看上去很像有東西洗脫出來，并且峰寬比較大，像共洗脫現象似的。基線漂移不像原來那樣慢慢的變平，而是一直朝一個方向漂，比如向上漂，平衡一天也可能是一直在漂。柱壓變化柱壓變化影響較小，除非是檢測池太臟，堵塞嚴重，會對柱壓產生小于1000psi的影響（一般的用到光的檢測池也就耐這么高的壓力），但這種情況不會持續發生，給你排查的時間有限，堵的時間長了，會爆池，壓力也就沒有影響了。峰面積變化峰面積應該是變小。檢測池臟時會有兩種情形影響檢測靈敏度。一方面是基線噪聲變大，從整體上影響信噪比。另一方面，檢測池臟了對于光檢測原理的檢測器來說（UV、PDA、DAD、FLD、ELSD）首先會減弱通過檢測池的光強度，光強度降低了，靈敏度就會下降，相當于檢測器光源的能量降低。保留時間有時由于檢測器臟了，系統壓力增加，然后某個接口的地方出現漏液，導致保留時間出現一些變化，不過這種可能性較小。攜帶污染類型、發生原因和減少方法“攜帶污染”（或俗稱“殘留”）是用來描述一種樣品污染的術語，它會導致分析物的色譜峰在之后的樣品分析中再次出現，而這些分析實際上并不包含樣品（例如空白樣或純溶劑）。這種污染可持續數次連續分析，通常在每次進樣后污染量都會減少（這是排除故障時的關鍵觀察點）。如果提供了適當的儀器培訓，現代高效液相色譜系統的設計會使攜帶污染現象變得極為罕見，但當攜帶現象出現時，污染可能是由于以下原因造成的：(1) 缺乏高效液相色譜維護；(2) 樣品超載，造成色譜柱殘留；(3) 洗滌瓶使用不當和/或樣品瓶選擇不當；(4) 操作員在如何設置和使用色譜系統方面的培訓不足。注：適當的操作員培訓可大大降低污染的機率，也是最容易被忽視的原因。樣品超載如果注入的樣品濃度過高，使色譜柱超載，那么在分析結束后很長時間內，色譜柱仍有可能繼續滲出樣品。如果沒有定期沖洗和清潔色譜柱，也會導致類似的問題，因為隨著時間的推移，保留的物質會從色譜柱中釋放出來。要避免這一問題，首先要進行載量研究，確定色譜柱上能有效承載多少物質。如果采用的是等度方法，需要創建一種清洗方法，使用比您的方法更強的溶劑（通常使用梯度），這樣就能在兩次分析之間洗去任何強保留物質，因為材料會保留在色譜柱上，必須每隔一段時間使用較強的洗滌液將其洗掉。清洗瓶的使用和/或樣品瓶的選擇許多老式自動進樣器設計使用低壓進樣器，這些進樣器需要單獨的清洗瓶，因為它們不需要持續清洗。清洗瓶中應注入流動相或溶液，以溶解系統中可能殘留的任何物質。如果使用的是現代高壓“直通式 ”自動進樣器，則很少會出現攜帶污染問題，因為這些現代進樣器使用高壓泵將樣品吸入并直接注入流動流路，從而減少了對任何清洗階段的需求。注：對于多次穿刺的小瓶，必須更換隔膜或使用密封時間足夠長的隔膜材料，以減少這種影響。擦拭隔膜針可消除部分污染。這個問題會造成兩種污染。(a)當針頭浸入同樣有一個大隔膜開口的樣品瓶（相同或不同的樣品瓶）時，針頭會帶著一些樣品沉積到新的樣品瓶（或樣品瓶的隔膜上）。(b)污染物還可能順著針頭本身流下，在進樣時滴到針座上，造成針座或樣本污染。減少針頭外部污染的最簡單的解決方案之一，就是在洗瓶中加入一種溶液，這種溶液經過優化，可以快速將樣品溶解到溶液中。這聽起來很簡單，但許多色譜分析人員選擇的清洗液根本無法提高洗針的清潔度。例如肽、蛋白質、脂肪、油類和/或脂類等樣品可能很麻煩，因為它們的溶解性可能與所選的流動相不符；流動相通常是理想的，但在某些情況下卻不起作用。這些清洗瓶必須經常更換（只需在系統中設置多個清洗瓶位置即可）。此外，每次使用清洗瓶時都應將瓶蓋關閉，以減少吸取污染（此步驟至關重要）。缺乏 HPLC 維護大多數自動進樣器閥門，依靠旋轉密封將樣品從針環路轉移到系統的流路中。這些閥門內的部件會磨損，應至少每6個月檢查一次，必要時更換。此外，還應經常檢查針座和針是否有磨損或泄漏的跡象。注：查看進樣器是否有泄漏跡象。泄漏總是表明存在問題，應立即解決。有泄漏時不要進行進樣。您的方法和獲得的數據將無效。應更換任何磨損的部件并測試系統性能。造成樣品攜帶污染的最常見原因之一是：樣品注入閥旋轉密封磨損。磨損的密封件會使樣品在兩次進樣之間滯留在其空間和凹槽中，導致在隨后的分析中出現樣品色譜峰。此外，緩沖鹽也會滯留在密封件之間，造成泄漏或攜帶污染。例行的 HPLC 維護以及每天沖洗所有緩沖液/鹽（如適用）可消除這些問題。操作員培訓不足良好的色譜分析需要全面了解所使用的硬件和HPLC的基本原理。您必須能夠對系統的完整流路和方法開發中使用的色譜概念進行故障排除，通過指導，采用合理的步驟來學習。
文章來源：網絡
基線變化基線變化一般不會很有規律，如果在自動量程下監控基線情況，不可能得到原來儀器理想狀態的有規律的基線在高頻率上下浮動的變化，而是有時候會得到低頻率變化的峰，看上去很像有東西洗脫出來，并且峰寬比較大，像共洗脫現象似的。基線漂移不像原來那樣慢慢的變平，而是一直朝一個方向漂，比如向上漂，平衡一天也可能是一直在漂。柱壓變化柱壓變化影響較小，除非是檢測池太臟，堵塞嚴重，會對柱壓產生小于1000psi的影響（一般的用到光的檢測池也就耐這么高的壓力），但這種情況不會持續發生，給你排查的時間有限，堵的時間長了，會爆池，壓力也就沒有影響了。峰面積變化峰面積應該是變小。檢測池臟時會有兩種情形影響檢測靈敏度。一方面是基線噪聲變大，從整體上影響信噪比。另一方面，檢測池臟了對于光檢測原理的檢測器來說（UV、PDA、DAD、FLD、ELSD）首先會減弱通過檢測池的光強度，光強度降低了，靈敏度就會下降，相當于檢測器光源的能量降低。保留時間有時由于檢測器臟了，系統壓力增加，然后某個接口的地方出現漏液，導致保留時間出現一些變化，不過這種可能性較小。攜帶污染類型、發生原因和減少方法“攜帶污染”（或俗稱“殘留”）是用來描述一種樣品污染的術語，它會導致分析物的色譜峰在之后的樣品分析中再次出現，而這些分析實際上并不包含樣品（例如空白樣或純溶劑）。這種污染可持續數次連續分析，通常在每次進樣后污染量都會減少（這是排除故障時的關鍵觀察點）。如果提供了適當的儀器培訓，現代高效液相色譜系統的設計會使攜帶污染現象變得極為罕見，但當攜帶現象出現時，污染可能是由于以下原因造成的：(1) 缺乏高效液相色譜維護；(2) 樣品超載，造成色譜柱殘留；(3) 洗滌瓶使用不當和/或樣品瓶選擇不當；(4) 操作員在如何設置和使用色譜系統方面的培訓不足。注：適當的操作員培訓可大大降低污染的機率，也是最容易被忽視的原因。樣品超載如果注入的樣品濃度過高，使色譜柱超載，那么在分析結束后很長時間內，色譜柱仍有可能繼續滲出樣品。如果沒有定期沖洗和清潔色譜柱，也會導致類似的問題，因為隨著時間的推移，保留的物質會從色譜柱中釋放出來。要避免這一問題，首先要進行載量研究，確定色譜柱上能有效承載多少物質。如果采用的是等度方法，需要創建一種清洗方法，使用比您的方法更強的溶劑（通常使用梯度），這樣就能在兩次分析之間洗去任何強保留物質，因為材料會保留在色譜柱上，必須每隔一段時間使用較強的洗滌液將其洗掉。清洗瓶的使用和/或樣品瓶的選擇許多老式自動進樣器設計使用低壓進樣器，這些進樣器需要單獨的清洗瓶，因為它們不需要持續清洗。清洗瓶中應注入流動相或溶液，以溶解系統中可能殘留的任何物質。如果使用的是現代高壓“直通式 ”自動進樣器，則很少會出現攜帶污染問題，因為這些現代進樣器使用高壓泵將樣品吸入并直接注入流動流路，從而減少了對任何清洗階段的需求。注：對于多次穿刺的小瓶，必須更換隔膜或使用密封時間足夠長的隔膜材料，以減少這種影響。擦拭隔膜針可消除部分污染。這個問題會造成兩種污染。(a)當針頭浸入同樣有一個大隔膜開口的樣品瓶（相同或不同的樣品瓶）時，針頭會帶著一些樣品沉積到新的樣品瓶（或樣品瓶的隔膜上）。(b)污染物還可能順著針頭本身流下，在進樣時滴到針座上，造成針座或樣本污染。減少針頭外部污染的最簡單的解決方案之一，就是在洗瓶中加入一種溶液，這種溶液經過優化，可以快速將樣品溶解到溶液中。這聽起來很簡單，但許多色譜分析人員選擇的清洗液根本無法提高洗針的清潔度。例如肽、蛋白質、脂肪、油類和/或脂類等樣品可能很麻煩，因為它們的溶解性可能與所選的流動相不符；流動相通常是理想的，但在某些情況下卻不起作用。這些清洗瓶必須經常更換（只需在系統中設置多個清洗瓶位置即可）。此外，每次使用清洗瓶時都應將瓶蓋關閉，以減少吸取污染（此步驟至關重要）。缺乏 HPLC 維護大多數自動進樣器閥門，依靠旋轉密封將樣品從針環路轉移到系統的流路中。這些閥門內的部件會磨損，應至少每6個月檢查一次，必要時更換。此外，還應經常檢查針座和針是否有磨損或泄漏的跡象。注：查看進樣器是否有泄漏跡象。泄漏總是表明存在問題，應立即解決。有泄漏時不要進行進樣。您的方法和獲得的數據將無效。應更換任何磨損的部件并測試系統性能。造成樣品攜帶污染的最常見原因之一是：樣品注入閥旋轉密封磨損。磨損的密封件會使樣品在兩次進樣之間滯留在其空間和凹槽中，導致在隨后的分析中出現樣品色譜峰。此外，緩沖鹽也會滯留在密封件之間，造成泄漏或攜帶污染。例行的 HPLC 維護以及每天沖洗所有緩沖液/鹽（如適用）可消除這些問題。操作員培訓不足良好的色譜分析需要全面了解所使用的硬件和HPLC的基本原理。您必須能夠對系統的完整流路和方法開發中使用的色譜概念進行故障排除，通過指導，采用合理的步驟來學習。
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