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微生物實驗室最少不了的實驗儀器之一就是滅菌器，一般實驗室常用的是高壓蒸汽滅菌器。GB 4789.1-2016中要求：實驗設(shè)備應(yīng)定期進行檢查和/或檢定（加貼標志）、維護和保養(yǎng)，以確保工作性能和操作安全。但你的滅菌器有沒有類似的檢查呢？如果要做類似的驗證，又需要怎么做呢？今天就給大家匯總一下高壓蒸汽滅菌器滅菌效果驗證的相關(guān)內(nèi)容。
高壓蒸汽滅菌器滅菌效果驗證一般有化學(xué)指示劑法、留點溫度計法、自制測溫管法和生物指示劑法，每種方法的原理都是相似的，主要是通過驗證滅菌時滅菌器里的溫度能否達到要求。我們可以根據(jù)自己實驗室的具體情況選擇其中一種或多種方法進行驗證。
一、化學(xué)指示劑法原理：化學(xué)指示劑在一定溫度與作用時間下，會受熱變色或變形，根據(jù)這一特點來判斷是否達到需要的滅菌參數(shù)。一般實驗室常用的是3M壓力滅菌指示膠帶，這種指示膠帶是利用滅菌前后膠帶顏色變化來判斷滅菌效果。它是由熱敏化學(xué)物質(zhì)與顯色劑及漆輔料制成油墨，并將油墨以條紋狀印制在特制的一面膠紙帶制成。指示膠帶可以直接粘貼于包裹外，長度不低于5cm，并輕壓膠帶以增加粘性和封包效果；在121℃持續(xù)20min或130℃持續(xù)4min后，膠帶上印有的斜行的白色指示線條會完全變黑，成為黑色線條；如變色不均勻或不徹底，可認為該包裹不符合滅菌條件。
二、留點溫度計法原理：留點溫度計法是利用水銀溫度計不回流的特性，其原理跟傳統(tǒng)體溫計相似，可以指示滅菌器在滅菌過程中達到的最高溫度。驗證時把水銀溫度計放在盛水的大三角瓶里，滅菌時把三角瓶放在滅菌器的上部和下部，滅菌結(jié)束后看水銀溫度計的溫度和要求溫度是否一致。此法只能驗證溫度，不能指示滅菌時間是否達到要求，因此是滅菌器驗證的最低標準。
三、自制測溫管法原理：利用一些化學(xué)藥品受熱熔化后再冷卻，晶體的外形不同的特性，把化學(xué)藥品密封在小玻璃管內(nèi)，滅菌時放在滅菌器里，滅菌完后觀察晶體的形狀，就可以判斷溫度是否達標。常用的試劑是苯甲酸，苯甲酸的熔點為121-123℃，跟我們要求的滅菌器的滅菌溫度基本吻合，因此滅菌時把固體苯甲酸密封在小玻璃管內(nèi)放進滅菌器，滅菌結(jié)束就可以觀察苯甲酸的狀態(tài)來驗證滅菌器是否達到了要求溫度。這種方法的局限跟留點溫度計法相同，也只能指示滅菌時的溫度，對滅菌時間是否達到要求無法判斷。
四、生物指示劑法原理：利用非致病性的嗜熱脂肪桿菌的芽孢作為指示菌，來測定熱力滅菌的效果。嗜熱脂肪桿菌的芽孢對熱的抗性較強，其耐熱能力與病原微生物肉毒梭菌芽孢相似，以此為指示菌，驗證滅菌器能否達到滅菌要求。生物指示劑分為三種：芽孢懸液、芽胞菌片、菌片和培養(yǎng)基混合指示管。一般放在滅菌容器的5個點：下層的前、中、后和上層、中層的中央點。滅菌后取指示劑接種到溴甲酚紫-葡萄糖蛋白胨水中，55-60℃培養(yǎng)2-7天，若培養(yǎng)基澄清、顏色沒有變化即說明芽孢被殺死，滅菌器滅菌效果良好；如果培養(yǎng)基黃色渾濁，說明芽孢未被殺滅，滅菌器滅菌效果不合格。芽孢懸液和芽孢菌片的驗證方法均是如此。目前實驗室還常用商品化的生物指示管，其原理與芽孢懸液和芽胞菌片相同，指示管中有嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢和培養(yǎng)液玻璃小管，將指示管放在滅菌容器內(nèi)的各個點上，高壓滅菌后，將管中盛培養(yǎng)液的玻璃管擠碎，培養(yǎng)液從內(nèi)部的小管中被放出，放入56℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，同時做陽性對照。若是滅菌器滅菌效果不合格，指示管內(nèi)的芽孢復(fù)活后生長會改變?nèi)鉁念伾侨鉁優(yōu)辄S色；若是滅菌器滅菌效果良好則管內(nèi)芽孢被滅活不再生長，肉湯仍舊是原來的紫色。對于滅菌器的效果驗證，目前并沒有相關(guān)標準嚴格的要求驗證的頻次，但是實驗室應(yīng)當(dāng)自行制定驗證頻次規(guī)定，并嚴格按照要求進行。從操作性和驗證結(jié)論兩個方面出發(fā)，小編推薦使用指示膠帶和生物指示管，因為這兩種方法操作簡單，可以對滅菌效果進行全面的驗證。
附：滅菌時的注意事項（一些進口的全自動滅菌鍋可不用考慮排氣）使用高壓蒸氣滅菌器時，首先應(yīng)注意在開放蒸氣的同時，排除滅菌器內(nèi)的冷空氣。必須將器內(nèi)冷空氣全部排除后，才可關(guān)閉排氣孔。假如滅菌器內(nèi)仍存留有部分空氣時，則壓力表上雖已達到了某一壓力值，但器內(nèi)之溫度仍未達到相應(yīng)之度數(shù)。存留的空氣越多，則二者相差也越大，器內(nèi)溫度不足，滅菌則不徹底。（很多人在做發(fā)酵法培養(yǎng)基滅菌時會出現(xiàn)小導(dǎo)管中有氣泡，不妨也可以嘗試多排出滅菌器內(nèi)的冷空氣，有奇效哦）。
文章來源：網(wǎng)絡(luò)
高壓蒸汽滅菌器滅菌效果驗證一般有化學(xué)指示劑法、留點溫度計法、自制測溫管法和生物指示劑法，每種方法的原理都是相似的，主要是通過驗證滅菌時滅菌器里的溫度能否達到要求。我們可以根據(jù)自己實驗室的具體情況選擇其中一種或多種方法進行驗證。
一、化學(xué)指示劑法原理：化學(xué)指示劑在一定溫度與作用時間下，會受熱變色或變形，根據(jù)這一特點來判斷是否達到需要的滅菌參數(shù)。一般實驗室常用的是3M壓力滅菌指示膠帶，這種指示膠帶是利用滅菌前后膠帶顏色變化來判斷滅菌效果。它是由熱敏化學(xué)物質(zhì)與顯色劑及漆輔料制成油墨，并將油墨以條紋狀印制在特制的一面膠紙帶制成。指示膠帶可以直接粘貼于包裹外，長度不低于5cm，并輕壓膠帶以增加粘性和封包效果；在121℃持續(xù)20min或130℃持續(xù)4min后，膠帶上印有的斜行的白色指示線條會完全變黑，成為黑色線條；如變色不均勻或不徹底，可認為該包裹不符合滅菌條件。
二、留點溫度計法原理：留點溫度計法是利用水銀溫度計不回流的特性，其原理跟傳統(tǒng)體溫計相似，可以指示滅菌器在滅菌過程中達到的最高溫度。驗證時把水銀溫度計放在盛水的大三角瓶里，滅菌時把三角瓶放在滅菌器的上部和下部，滅菌結(jié)束后看水銀溫度計的溫度和要求溫度是否一致。此法只能驗證溫度，不能指示滅菌時間是否達到要求，因此是滅菌器驗證的最低標準。
三、自制測溫管法原理：利用一些化學(xué)藥品受熱熔化后再冷卻，晶體的外形不同的特性，把化學(xué)藥品密封在小玻璃管內(nèi)，滅菌時放在滅菌器里，滅菌完后觀察晶體的形狀，就可以判斷溫度是否達標。常用的試劑是苯甲酸，苯甲酸的熔點為121-123℃，跟我們要求的滅菌器的滅菌溫度基本吻合，因此滅菌時把固體苯甲酸密封在小玻璃管內(nèi)放進滅菌器，滅菌結(jié)束就可以觀察苯甲酸的狀態(tài)來驗證滅菌器是否達到了要求溫度。這種方法的局限跟留點溫度計法相同，也只能指示滅菌時的溫度，對滅菌時間是否達到要求無法判斷。
四、生物指示劑法原理：利用非致病性的嗜熱脂肪桿菌的芽孢作為指示菌，來測定熱力滅菌的效果。嗜熱脂肪桿菌的芽孢對熱的抗性較強，其耐熱能力與病原微生物肉毒梭菌芽孢相似，以此為指示菌，驗證滅菌器能否達到滅菌要求。生物指示劑分為三種：芽孢懸液、芽胞菌片、菌片和培養(yǎng)基混合指示管。一般放在滅菌容器的5個點：下層的前、中、后和上層、中層的中央點。滅菌后取指示劑接種到溴甲酚紫-葡萄糖蛋白胨水中，55-60℃培養(yǎng)2-7天，若培養(yǎng)基澄清、顏色沒有變化即說明芽孢被殺死，滅菌器滅菌效果良好；如果培養(yǎng)基黃色渾濁，說明芽孢未被殺滅，滅菌器滅菌效果不合格。芽孢懸液和芽孢菌片的驗證方法均是如此。目前實驗室還常用商品化的生物指示管，其原理與芽孢懸液和芽胞菌片相同，指示管中有嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢和培養(yǎng)液玻璃小管，將指示管放在滅菌容器內(nèi)的各個點上，高壓滅菌后，將管中盛培養(yǎng)液的玻璃管擠碎，培養(yǎng)液從內(nèi)部的小管中被放出，放入56℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，同時做陽性對照。若是滅菌器滅菌效果不合格，指示管內(nèi)的芽孢復(fù)活后生長會改變?nèi)鉁念伾侨鉁優(yōu)辄S色；若是滅菌器滅菌效果良好則管內(nèi)芽孢被滅活不再生長，肉湯仍舊是原來的紫色。對于滅菌器的效果驗證，目前并沒有相關(guān)標準嚴格的要求驗證的頻次，但是實驗室應(yīng)當(dāng)自行制定驗證頻次規(guī)定，并嚴格按照要求進行。從操作性和驗證結(jié)論兩個方面出發(fā)，小編推薦使用指示膠帶和生物指示管，因為這兩種方法操作簡單，可以對滅菌效果進行全面的驗證。
附：滅菌時的注意事項（一些進口的全自動滅菌鍋可不用考慮排氣）使用高壓蒸氣滅菌器時，首先應(yīng)注意在開放蒸氣的同時，排除滅菌器內(nèi)的冷空氣。必須將器內(nèi)冷空氣全部排除后，才可關(guān)閉排氣孔。假如滅菌器內(nèi)仍存留有部分空氣時，則壓力表上雖已達到了某一壓力值，但器內(nèi)之溫度仍未達到相應(yīng)之度數(shù)。存留的空氣越多，則二者相差也越大，器內(nèi)溫度不足，滅菌則不徹底。（很多人在做發(fā)酵法培養(yǎng)基滅菌時會出現(xiàn)小導(dǎo)管中有氣泡，不妨也可以嘗試多排出滅菌器內(nèi)的冷空氣，有奇效哦）。
文章來源：網(wǎng)絡(luò)
