9.什么是Chip-seq

染色質(zhì)免疫共沉淀技術（ChromatinImmunoprecipitation，ChIP）也稱結合位點分析法，是研究體內(nèi)蛋白質(zhì)與DNA相互作用的有力工具，通常用于轉(zhuǎn)錄因子結合位點或組蛋白特異性修飾位點的研究。將ChIP與第二代測序技術相結合的ChIP-Seq技術，能夠高效地在全基因組范圍內(nèi) 檢測與組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等互作的DNA區(qū)段。

ChIP-Seq的原理是：首先通過染色質(zhì)免疫共沉淀技術（ChIP）特異性地富集目的蛋白結合的DNA片段，并對其進行純化與文庫構建；然后對富集得到的DNA片 段進行高通量測序。研究人員通過將獲得的數(shù)百萬條序列標簽精確定位到基因組上，從而獲得全基因組范圍內(nèi)與組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等互作的DNA區(qū)段信息。

10.什么是CHIRP-Seq

CHIRP-Seq( Chromatin Isolation by RNA Purification )是一種檢測與RNA綁定的DNA和蛋白的高通量測序方法。方法是通過設計生物素或鏈霉親和素探針，把目標RNA拉下來以后，與其共同作用的DNA染色體片段就會附在到磁珠上，最后把染色體片段做高通量測序，這樣會得到該RNA能夠結合到在基因組的哪些區(qū)域，但由于蛋白測序技術不夠成熟，無法知道與該RNA結合的蛋白。

11.什么是RIP-seq

RNA Immunoprecipitation是研究細胞內(nèi)RNA與蛋白結合情況的技術，是了解轉(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡動態(tài)過程的有力工具，能幫助我們發(fā)現(xiàn)miRNA的調(diào)節(jié)靶點。這種技術運用針對目標蛋白的抗體把相應的RNA-蛋白復合物沉淀下來，然后經(jīng)過分離純化就可以對結合在復合物上的RNA進行測序分析。

RIP可以看成是普遍使用的染色質(zhì)免疫沉淀ChIP技術的類似應用，但由于研究對象是RNA-蛋白復合物而不是DNA-蛋白復合物，RIP實驗的優(yōu)化條件與ChIP實驗不太相同（如復合物不需要固定，RIP反應體系中的試劑和抗體絕對不能含有RNA酶，抗體需經(jīng)RIP實驗驗證等等）。RIP技術下游結合 microarray技術被稱為RIP-Chip，幫助我們更高通量地了解癌癥以及其它疾病整體水平的RNA變化。

12.什么是CLIP-seq

CLIP-seq,又稱為HITS-CLIP，即紫外交聯(lián)免疫沉淀結合高通量測序(crosslinking-immunprecipitation and high-throughput sequencing), 是一項在全基因組水平揭示RNA分子與RNA結合蛋白相互作用的技術。其主要原理是基于RNA分子與RNA結合蛋白在紫外照射下發(fā)生耦聯(lián)，以RNA結合蛋白的特異性抗體將RNA-蛋白質(zhì)復合體沉淀之后，回收其中的RNA片段，經(jīng)添加接頭、RT-PCR等步驟，對這些分子進行高通量測序，再經(jīng)生物信息學的分析和處理、總結，挖掘出其特定規(guī)律，從而深入揭示RNA結合蛋白與RNA分子的調(diào)控作用及其對生命的意義。