8. 線性
樣本經(jīng)梯度稀釋后檢測分析即為線性分析，此過程也是用于消除樣本的基質(zhì)效應(yīng)。基質(zhì)效應(yīng)導(dǎo)致的結(jié)果有假陰性和假陽性兩種，在線性稀釋時(shí)就可以辨別出來，當(dāng)存在基質(zhì)效應(yīng)時(shí)樣本的稀釋線性就不會(huì)滿足，說明該類樣本有可能不適用ELISA kit，在研發(fā)階段就需要優(yōu)化反應(yīng)體系等消除基質(zhì)效應(yīng)帶來的干擾。
9. 回收率
回收實(shí)驗(yàn)可檢測試劑盒是否受干擾因子的影響，也是辨別基質(zhì)效應(yīng)的一種方法。在研發(fā)過程中，一般會(huì)采用低、中和高濃度的分析物被摻入到已知濃度的驗(yàn)證樣本中，進(jìn)行回收實(shí)驗(yàn)測定，回收率應(yīng)介于80%-120%，表明試劑盒的性能較好。
10. 穩(wěn)定性
即試劑盒在有效期內(nèi)的穩(wěn)定性。通常采用加速降解的方法來推斷試劑盒的有效期。通常試劑盒在37℃放置一天折合有效期2個(gè)月，實(shí)際工作中，一般將試劑盒在37℃破壞3-7天后，然后檢測上述指標(biāo)，觀察是否在范圍內(nèi)。也可留樣至有效期后進(jìn)行檢驗(yàn)，來衡量有效期，對(duì)于批量大的指標(biāo)，可將加速降解和留樣檢驗(yàn)相結(jié)合的方法。
另外，ELISA實(shí)驗(yàn)操作時(shí)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)如下：
1、嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作。操作前將試劑在室溫下平衡30～60min。
2、加樣后及時(shí)放人孵箱。標(biāo)本較多時(shí)，要分批操作。按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間，防止孵育時(shí)間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗徹di。
3、封板溫育時(shí)，各孔一定要封嚴(yán)，防止陽性標(biāo)本的液體蒸發(fā)，產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。
4、用洗板機(jī)洗板時(shí)，保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后好在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干：還要防止針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板的過程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。
5、合理安排檢測量，以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。
6、加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
7、顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用。
8、加樣時(shí)保持顯色劑不外流;A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
9、應(yīng)保證C清潔，整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸。以上的措施可以使“花板”降至低限度。從而提高檢測的特異性。并得到更準(zhǔn)確、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。