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3M快速金黃色葡萄球菌數測試片操作以及判讀 |
| 一、測試金黃色葡萄球菌數 操作方法 | |
 1、未拆封包請冷藏于≤8℃，并在保存期限內使用完。在高溫度的環境中可能出現冷凝水，最好在拆封前將整包回溫至室溫。 |
  2-3、已開封時，將封口已膠帶封緊，存放于25℃/濕度50%以下,并于一個月內使用完. 請勿將已開封包冷藏于冰箱 |
 4、使用無菌的容器置入樣品，已備將樣品作10倍或更大倍數的稀釋。 |
 5、加入適量的無菌稀釋液:Butterfield s phosphate buffer(IDF phosphate buffer,0.0425g/L of KH2PO4 adjusted to pH 7.2),0.1%peptone water ,people saltdiluent (ISO method 6887),saline solution (0.85-0.90%),bisulfite-free letheen broth,或無菌蒸餾水。 不可用buffered peptone water 或buffered 含有citrate ,bisulfite,or thiosulfate ;它們可能抑止菌生長。 |
 6、攪拌或均質樣品。 調整樣品稀釋液的pH值至6.5－7.5。請以1N NaOH調整酸性產品pH值，以1N HCI調整堿性產品。 |
 7、將測試片放置在平坦的外表面，揭起上層膜。使用吸管將1ml樣品垂直低在測試片的中央處。 |
 8、小心卷會上層膜，避免氣泡進入。不要讓上層膜直接蓋回。 |
 9、使用壓板放置在上層膜中央處。輕輕的壓下，是樣品液均勻覆蓋于圓形的培養面積上。且勿扭轉或滑動亞板。拿起亞板，靜置1分鐘以使培養基凝固。 |
 10、測試片的透明膜朝上可堆疊至10片，培養于35℃＋1℃或37℃＋1℃下，24＋2小時。 |
 11、培養之后，菌落可能生長，但在檢測片上看不到，因為指示劑是含在金黃色葡萄球菌檢測反應片上。 |
 12、檢測片移至36℃＋2℃培養箱，培養1－4小時。注意：如果菌落需要進一步測試，檢測片培養不要超過一個小時。 |
 13、使用無菌鑷子取出圓形的反應片，再掀開檢測片上層膜小心置入反應片。在江上層膜放下。 |
 14、為了確定反應片與培養膠均勻接觸及避免夾帶任何氣泡，可以使用一個彎曲的玻璃棒（L玻璃棒）輕壓檢測片。 |
 15、將已置入反應片的金黃測葡萄球菌檢測片培養于35℃＋1℃或37℃＋1℃，1－3小時。 |
 16、可目視或使用菌落計數器并可參讀判讀卡計算菌落數。 |
 17、菌落可以分散做為進一步的鑒定，掀起上層膜，有培養膠上挑起菌落。 |
| 二、測試金黃色葡萄球菌數 判讀方法 | |
| 快速金黃色葡萄球菌檢驗測試片（Petrifilm RSN）由兩部分組成，第一部分是金黃色葡萄球菌培養基片，次檢驗片含有修正Baird-Pdker 營養物幾一冷水可溶解的膠質，第二部分是熱安定核酸酶（TNase）反應片，包含有DNA，Toludine RSN-O（甲苯胺籃）及四唑指示劑(Terazolium),此一指示劑有助于菌落的計數及確定葡萄球菌熱安定核酸酶的存在.
熱安定核酸酶是一種金黃色葡萄球菌的酵素產物,在高溫下能維持穩定, 熱安定核酸酶的檢測象凝固酶反映一樣,是一種鑒定金黃色葡萄球菌的方法. 在Petrifilm RSN 檢測片上，熱安定核酸酶反應看起來像是粉紅色環帶包圍著的一個紅色、或籃子菌落. Petrifilm RSN 檢測片必須與Petrifilm熱安定核酸酶反應片一起使用,單獨使用將不會顯示菌落,因為具有輔助計數菌落的指示劑是在反應片上,而不是在Petrifilm RSN檢測片上。 |
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 S.aureus count=22本圖片顯示一個典型的petrifilm RSA檢測片上的金黃色葡萄球菌的菌落,計算所有粉紅色環帶的菌落既是S.aureus,菌落可能是紅色或藍色. |
 S.aureus count=0圖2顯示一個置人petrifilm 熱安定核酸酶反應片的petrifilm RSA 檢測片,在這檢測片上看不到菌落或熱安定核酸酶環帶. |
 S.aureus count=4熱安定核酸酶反應的一種指示劑造成金黃色葡萄球菌呈紅色菌落,第二種指示劑使得熱安定核酸酶環帶顯示粉紅色. |
 S.aureus count=36因為有些金黃色葡萄求菌只生產少量的熱安定核酸酶,所以無論大小計算所有的Tnase環帶菌落為金黃色葡萄球菌. Petrifilm RSA 檢測片上Tnase環帶的適當計數范圍大約是15-100個菌落.計數范圍高低端視 金黃色葡萄球菌生產Tnase環帶量的多寡及其他菌相生長狀況. |
 S.aureus count = 38有些金黃色葡萄球菌產生大量的熱安定核酸酶.這一類的金黃色葡萄球菌,于最后一階段培養時,只需30分鐘培養既可計算.因為已形成可目測的Tnase環帶. 注意:圖4與圖5有大約相同的菌落數.至于Tnase環帶大小的差異,可能來自菌株的不同或最后階段培養時間長短的差異. |
 Estimated s.aureus count = 150Petrifilm 圖形的生長面積大約30平方公分.可以 估算方式,先數三個方格內粉紅色環帶的數量,在乘以10,即為所有在圖形培養范圍內的菌落數. |
 S.aureus count = TNTC當大量的金黃色葡萄球菌出現時,粉紅色Tnase 環帶可能重疊造成整個檢測片變成粉紅色. 圖7顯示一個檢測片中,因菌落過多無法計數(TNTC).建議進一步稀釋樣品來鑒定正確的菌落數. |
 S.aureus count = 3偶爾水化培養基的菌株會長在檢測片上.他們呈不規則形的紅色菌落,而且周圍無粉紅色Tnase環帶.亦不視為金黃色菌落但無粉紅色Tnase環帶,亦不視為金黃色葡萄球菌(如圓圈2). 若有大的食物顆粒存在,反應片不易與培養基均勻秘合,易造成圓形范圍邊緣產生氣泡(如圓圈3). |
 S. aureus count = 15食物顆粒是不規則形狀可能呈紅,藍或綠色(如圓圈4). 當二個金黃色葡萄球菌生長的相當靠近的時候,會導致其Tnase 環帶.計數時,請視為二個菌落(如圓圈5). |
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